Allergen-specific immunotherapy with monomeric allergoid from house dust mites dermato-phagoides pteronyssinus in a mouse allergic rhinitis model

Full Text

Аллерген-специфическая иммунотерапия (АСИТ) является этиологически обоснованным, влияющим на все звенья аллергического процесса патогенетическим видом лечения аллергических Российский Аллергологический ^^урнал № 6-2016 43 Оригинальные статьи болезней, которые достигли уровня пандемии в индустриально развитых странах, где заболеваемость населения составляет 20-30% [1-3]. Использование АСИТ, примененной впервые в 1911 г. [4, 5], продолжает сталкиваться с проблемами безопасности и эффективности. Традиционная (инъекционная) АСИТ, основанная на использовании нативных аллергенных экстрактов, сопряжена с риском появления местных и системных реакций, причем последние часто носят угрожающий жизни характер, что может привести к фатальным последствиям [6, 7]. Поэтому пути усовершенствования АСИТ связаны с повышением ее безопасности и эффективности и направлены на разработку как новых подходов в создании гипоаллергенных препаратов, так и на внедрение в клиническую практику альтернативных путей введения аллергенных экстрактов (таких как сублингвальный, интраназальный, пероральный, накожный и др., а также включая комбинацию инъекционного и сублингвального путей введения). В предыдущих исследованиях показана возможность химической модификации аллергенов методом сукцинилирования для получения мономерных аллергоидов с пониженной аллергенностью и сохраненной иммуногенностью, что в случае АСИТ этими аллергоидами приводит к переключению иммунного ответа организма на аллерген с ^2-за-висимого на ТЫ-зависимый [8]. Одной из распространенных форм круглогодичной аллергии является аллергия к клещам домашней пыли, которой страдают во всем мире примерно 10-20% населения [9]. Причем причинно-значимая роль клещей Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae в появлении симптомов атопических аллергических заболеваний хорошо установлена [10]. Несколько контролируемых клинических исследований по изучению эффективности инъекционной и сублингвальной АСИТ при аллергии к клещам домашней пыли показали противоречивые результаты [11]. Поэтому создание новых гипоаллергенных препаратов для лечения аллергии к клещам домашней пыли, основанных на новых подходах, крайне востребовано. В предыдущем исследовании нами получен гипоаллергенный мономерный аллергоид из клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus, обладающий пониженной аллергенностью (способностью связывать аллерген-специфический IgE) и сохраненной (даже увеличенной) иммуногенностью (способностью индуцировать аллерген-специфический IgG1 и IgG2a) [12]. Целью данного исследования было изучение эффективности экспериментальной АСИТ мономерным аллергоидом, полученным из аллергенного экстракта клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus (Der p), на мышиной модели аллергического ринита (АР). Материалы и методы Жидкий экстракт клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronussinius (D1), полученный из ФГБУ НИИВС им. И.И. Мечникова и произведенный согласно действующему лабораторному регламенту на основании патента RU 2331437 C1 (A61K39/35), после грубой и стерилизующей фильтрации был лиофилизирован, после чего часть высушенного экстракта D1 была модифицирована сукцинилированием (sD1), как описано ранее [12]. Модифицированый sD1 представлял собой мономерный аллергоид, хорошо растворимый в воде и физиологическом растворе. Данные по экспериментальной АСИТ на модели экспериментального аллергического ринита с использованием мономерного аллергоида sD1 получены с использованием самок мышей линии BALB/c, поставленных из питомника ГУНЦБМТ «Столбовая». Возраст мышей на момент начала эксперимента составлял 8 нед, а их масса тела колебалась в пределах 19-21 г. Работа с лабораторными животными проводилась в соответствии с приказом МЗСР РФ № 267 от 19.06.2003 г. «Правила лабораторной практики в Российской Федерации» и «Положением об этическом отношении к лабораторным животным ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России. В течение эксперимента мыши находились в клетках для содержания лабораторных животных «клетки-стандарт Т-3» производства ООО «НПК Открытая наука» (Россия) на территории вивария ВОНЦ им. Н.Н. Блохина. Температура воздуха в виварии - 23 °С, относительная влажность - 40- 60%, световой режим - (12:12 ч). Животным был обеспечен неограниченный доступ к воде (ГОСТ 2874-82 Вода питьевая. Гигиенические требования и контроль за качеством) и полнорационному экструдированному комбикорму, рецепт ПК-120 для содержания лабораторных животных (мышей, крыс, хомяков), сертификат соответствия № РОСС RU. ПР 98. В 01272, ГОСТ Р 51849-2001 Р.5 производства ООО «Лабораторкорм» (Россия). На этапе сенсибилизации производилось систематическое наблюдение за состоянием животных (еженедельный визуальный осмотр), на этапах проведения экспериментальной АСИТ и челленджирования проводился ежедневный осмотр. Мыши были распределены на 5 групп (n=8 в группе) (рис. 1). 1-4-я группы иммунизировали вну-трибрюшинно (в/б) в объеме 0,5 мл фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) смесью 50 мкг/мышь (по белку) D1 и 2 мг Al(OH)3 трижды с интервалом 3 нед. 5-ю группу (отрицательный контроль) ложно иммунизировали 0,5 мл PBS. Экспериментальная АСИТ начиналась через десять дней после последней иммунизации, когда мышам вводили подкожно (п/к) D1 или sD1 в объеме 150 мкл PBS. Схемы АСИТ 44 Российский Аллергологический ^^урнал № 6-201 6 АСИТ мономерным аллергоидом из клещей домашней пыли Оценка клинических Плетизмография признаков Забор крови 1-я группа Забор крови Забор крови I-I-I-I-I-I-ь 0 7 14 21 28 35 42 4_4_4 50 мкг/мышь D1 + 2 мг Al(OH)3 в/б V=0,5 мл/мышь Гистологический анализ піні|ніні|ннн|пііп|інін|іін 49 56 63 70 77 84 91 HHHMtHMMI UM PBS п/к V=150 мкл/мышь 3xD1=20 мг/мл 2xD1=40 мг/мл V=50 мкл/мышь инА Оценка клинических Плетизмография признаков Забор крови 2-я группа I 1-1-1-1-I-Ь 0 7 14 21 28 35 42 t_t_4 50 мкг/мышь D1 + 2 мг Al(OH)3 в/б V=0,5 мл/мышь Забор крови Забор крови Гистологический анализ 11 П М I +11 < 1111 ПН 11 < П 11111 П I И 111 -1 49 56 63 70 77 84 91 HU MU MM MM MU 1 ID 100 1000 3xD1=20 мг/мл D1 мкг/м п/к V=150 мкл/мышь 2xD1=40 мг/мл V=50 мкл/мышь инА Оценка клинических Плетизмография признаков_Забор крови 3-я группа I-I-I-I-I-і-ь 0 7 14 21 28 35 42 1_4_4 50 мкг/мышь D1 + 2 мг Al(OH)3 в/б V=0,5 мл/мышь Забор крови Забор крови Гистологический анализ П1Н||Н1Н||Н11Н|И11П||НМЦ11Н 49 56 63 70 77 84 91 4 4 і м t t 4 шн 3xD1=20 мг/мл 2xD1=40 мг/мл V=50 мкл/мышь инА 100 550 lOOO sD1 мкг/м п/к V=150 мкл/мышь 4-я группа I 1-1-ь 0 7 14 21 1_L Оценка клинических Плетизмография признаков_Забор крови Забор крови Забор крови 111 П 11 U 111111 И I U 1111111 11N 111111 I I Гистологический анализ 28 35 42 м 49 50 мкг/мышь D1 + 2 мг Al(OH)3 в/б V=0,5 мл/мышь 56 63 I t 100 S50 1000 sD1 мкг/мышь п/к V=150 мкл/мышь 70 77 84 91 4 t I t 44444 1000 ,3xD1=20 мг/мл sD1 мкг/мышь 2xD1=40 мг/мл с/л V=50 мкл/мышь ИНА Оценка клинических Плетизмография признаков Забор крови 5-я группа Забор крови Забор крови I 1 h I Ni и| I III I l|l ИМ l|l I III I I M 111 I |ll I I Гистологический анализ 14 21 JL 28 35 42 PBS в/б V=0,5 мл/мышь 49 56 63 70 77 84 91 PBS п/к V=150 мл/мышь PBS V=50 мкл/мышь ИНА 7 Рис. 1. Схема экспериментальной АСИТ на мышиной модели АР Российский Аллергологический ^^урнал № 6-2016 45 Оригинальные статьи для 1-5-й групп состояли в следующем (см. рис. 1): 1-я и 5-я группы получали ложную АСИТ PBS 16 раз через день; 2-я группа получала по 4 инъекции в возрастающих дозах D1 (1; 10; 100; 1000 мкг/мышь), всего 16 инъекций; 3-я группа получала инъекции sD1 в возрастающих дозах (три раза 100 мкг/мышь, два раза 550 мкг/мышь и три раза 1000 мкг/мышь), всего 8 инъекций с интервалом в три дня между инъекциями одной концентрации и с интервалом в пять дней перед повышением количества вводимого аллергоида; 4-я группа получала инъекции возрастающими дозами sD1 (один раз 100 мкг/мышь, два раза 550 мкг/мышь и один раз 1000 мкг/мышь) с трехдневным интервалом между инъекциями. Через 12 дней после последней инъекции животным 4-й группы начинали сублингвальное (с/л) введение sD1 по 1000 мкг/мышь в объеме 50 мкл PBS через день, всего 4 раза. Через 3 дня после окончания экспериментальной АСИТ мышей 1-4-й групп челленджировали интра-назальнми аппликациями (ИНА) по 50 мкл/мышь D1 в концентрации 20 мг/мл (по белку) три дня подряд, после чего еще два дня подряд в концентрации 40 мг/мл (по белку). 5-я группа получала ИНА PBS. Сразу после последнего челленджирования мышей проводили оценку проявлений клинических симптомов ринита (в частности чихания). Для этого после ИНА каждую мышь помещали в отдельную клетку, где в течение пяти минут производили подсчет актов чихания (учитывалось наличие характерного звука и движения головой). Для подсчета использовали «слепой метод» во избежание неосознанного искажения экспериментатором результатов. Через 24 ч после последнего челленджирования оценивали частоту дыхания при помощи использования плетизмографа - двухкамерного прибора FinePointe NAM (Buxco, США). После настройки прибора и калибровки мышей разных групп помещали в специальные пластиковые камеры плетизмографа, состоящие из назальной и торакальной частей, после чего фиксировали. В небулайзер назальной части камеры вносили по 10 мкл раствора метахолина (Мх) в концентрациях 6,25; 12,5 и 25 мг/мл. В течение 3 мин работы прибора для каждой концентрации Мх с использованием программного обеспечения рассчитывали показатель f (частота дыхания), который анализировали по каждой точке (концентрации Мх) для каждой группы. Критерием эффективности модели АР (1-я группа) было снижение показателя частоты дыхания мышей относительно группы отрицательного контроля (5-я группа), имеющей максимальные значения f, свидетельствующие о свободном (нормальном) воздушном потоке через носовую полость. Забор крови у животных из ретроорбитального пространства для получения сывороток произво дили три раза: через 7 дней после последней иммунизации, за 1 день до челленджирования и через 24 ч после последнего челленджирования. Уровни анти-Der p IgE, IgG1, IgG2a в индивидуальных сыворотках определяли твердофазным иммунофер-ментным анализом (ИФА), как описано ранее [13]. Через 48 ч после последнего челленджирования животных всех групп умерщвляли и проводили забор материала для гистологического исследования (голова целиком) с целью оценки гистологической картины выраженности аллергического ринита (АР) в носовой полости. Кратко: головы мышей после декапитации фиксировали в 10% нейтральном забуференном растворе формалина. После этого проводили процедуру декальцинации костной ткани головы: голову целиком переносили в реагент для быстрой декальцинации костной ткани (J.T BAKER, Décalcifier, Нидерланды) в соотношении объем ткани: объем реагента 1:20 на 6-8 ч при температуре 37 °С. Данный метод является модификацией метода декальцинации в соляной кислоте, описанного ранее [14]. Затем препаровальной иглой определяли качество декальцинации по мягкости плоских костей черепа путем прокола в нескольких местах. При полном размягчении костей черепа скальпелем проводили фронтальный разрез лицевого отдела черепа в области лунок верхних резцов и вырезали образцы ткани во фронтальной плоскости толщиной 3-5 мм, которые проводили, используя метод обработки в спирт-хлороформе, заливали в парафин, готовили гистологические срезы толщиной 3-5 мкм, окрашивали гематоксилин-эозином. При этом срезы готовили в направлении на голове: ростральном - к носу и каудальном - по направлению к затылку. Микроскопирование препаратов осуществляли при увеличении х400. Для полуколичественной оценки гистологических изменений использовали модифицированную шкалу (в баллах), основанную на данных Ennis и соавт. [15]: 1) Общая картина воспаления носовой полости: 0 баллов - отсутствует; 1 балл - слабо выраженная картина воспаления; 2 балла - умеренно выраженная картина воспаления; 3 балла - сильно выраженная картина воспаления. 2) Слизистая экссудация в носовой полости: 0 баллов - отсутствует; 1 балл - слабо выраженная (без клеток воспаления); 2 балла - умеренно выраженная (с наличием в составе экссудата умеренного количества клеток воспаления - полинуклеарных лейкоцитов); 3 балла - сильно выраженная (наличие в составе экссудата большого количества клеток воспаления - полинуклеарных лейкоцитов и макрофагов). 3) Гиперплазия слизистой оболочки носовой полости: 0 баллов - отсутствует; 1 балл - умерен 46 Российский Аллергологический ^^урнал № 6-201 6 АСИТ мономерным аллергоидом из клещей домашней пыли ное увеличение количества бокаловидных клеток и умеренное увеличение высоты эпителиального слоя; 2 балла - выраженное увеличение количества бокаловидных клеток и выраженное увеличение высоты эпителиального слоя. Результаты и обсуждение До начала АСИТ состояние животных во всех группах было одинаковым, то есть не отмечались какие-либо патологические проявления. Однако во 2-й группе после второго введения 1000 мкг/мышь D1 (78-й день эксперимента) отмечены местные реакции: выпадение шерсти в области инъекций и наличие уплотнения. На 80-й день у 50% мышей отмечены элементы изъязвления в области инъекции, причем этот показатель повышался до 75% на 82-й день. У животных остальных групп подобных проявлений отмечено не было. В то же время во время проведения челленджирования у мышей модельной группы (1-я группа) наблюдались слабо выраженные системные анафилактические реакции (боковое положение, характерное взъерошивание шерсти, отек мордочки). После последнего челленджирования отмечено, что при всех трех вариантах АСИТ во 2-4-й группах существенно снижалось проявление клинических признаков (по результатам подсчета актов чихания) (рис. 2 а). Причем наибольшее снижение количества актов чихания отмечено у животных 3-й группы, получавших мономерный аллергоид sD1. При инструментальной оценке клинических проявлений экспериментального ринита методом неинвазивной плетизмографии было выяснено, что в группах у животных, подвергавшихся ИНА экстрактом D1, заметно снижалась частота дыхания (рис. 2 б). Стоит отметить тот факт, что, несмотря на отсутствие улучшений по данному показателю в 3-й группе (АСИТ sD1), количество дыхательных актов в минуту у животных 2-й и 4-й групп (АСИТ соответственно D1 и sD1 - комбинированное п/к и с/л введение) было достоверно выше такового в 1-й группе (модель МАР). При оценке анти-Der p IgE было выявлено, что после третьей иммунизации уровень аллерген-спе-цифического IgE возрастал в 1-4-й группах (рис. 3). После завершения АСИТ уровни анти-Der p IgE во 2-й, 3-й и 4-й группах повышались как относительно 5-й группы (отрицательный контроль), так и относительно 1-й группы (положительный контроль - модель АР). Однако после проведения челленджирования наивысшие уровни анти-Der p IgE отмечались в 1-й и 4-й группах, в то время как в 3-й группе отмечалась тенденция к снижению, а во 2-й группе уровень анти-Derp IgE был существенно понижен в сравнении с 1-й группой. Относительно уровней анти-Der p IgG1 можно отметить устойчивое, статистически достоверное повышение во 2-й, о Ё 03 о ей 5 ф й" =; о б 300 280 260 240 220 200 180 160 140 120 100 80 * достоверное отличие от 5-й группы (р<0,05) # достоверное отличие от 1-й группы (р<0,05) RBS 6,25 12,50 25,00 Концентрация метахолина (мг/мл) * достоверное отличие от 5-й группы (р<0,05) # достоверное отличие от 1-й группы (р<0,05) Рис. 2. Оценка клинических проявлений у мышей BALB/c с АР, получавших АСИТ D1 или sD1: а - количество актов чихания у мышей после челленджирования; б - частота дыхания мышей после челленджирования 0,40 s 0,35 Щ 0,30 ІЗ 0,25 0 5 0,20 =; P15 1 0,10 О 0,05 0,00 1-я группа - модель АР g 2-я группа - п/к АСИТ D1 3-я группа - п/к АСИТ sD1 4-я группа - п/к + с/л АСИТ sD1 □ 5-я группа - отрицательный контроль І і І І п І я л 1 2 3 1-7 дней после последней иммунизации; 2-24 ч до начала челленджа; 3-24 ч после последнего челленджирования * достоверное отличие от 5-й группы (р<0,05) # достоверное отличие от 1-й группы (р<0,05) Рис. 3. Уровни анти-Derp IgE (M±m) в индивидуальных сыворотках мышей BALB/c с АР, получавших экспериментальную АСИТ D1 или sD1 (разведение сывороток 1:10) Российский Аллергологический ^^урнал № 6-2016 47 Оригинальные статьи 3-й и 4-й группах, получавших АСИТ, которое сохранялось и после челленджирования (рис. 4). Уровни анти-Der p IgG2a демонстрировали тенденцию к увеличению после АСИТ, которая была наиболее выражена в 3-й и 4-й группах, причем после челлен-джирования уровень анти-Der p IgG2a в 4-й группе был достоверно выше такового 1-й группы (рис. 5). Щ 1-я группа - модель АР §2-я группа - п/к АСИТ D1 т-я группа - п/к АСиТ sD1 Ш4-я группа - п/к + с/л АСИТ sD11 □5-я группа - отрицательный контроль 1 0,8 s 0,7 ° 0,6 тГ £ 0,5 о о 5 0,4 о = 0,3 а: аз 0 0,2 а> 1 0,1 ° 0,0 -0,1 1 2 3 1-7 дней после последней иммунизации; 2-24 ч до начала челленджа; 3-24 ч после последнего челленджирования * достоверное отличие от 5-й группы (р<0,05) # достоверное отличие от 1-й группы (р<0,05) Рис. 4. Уровни анти-Der p IgG1 (M±m) в индивидуальных сыворотках мышей BALB/c с АР, получавших экспериментальную АСИТ D1 или sD1 (разведение сывороток 1:5000) Щ 1-я группа - модель АР g 2-я группа - п/к АСИТ D1 Щ] 3-я группа - п/к АСИТ sD1 Ц 4-я группа - п/к + с/л АСИТ sD1 □ 5-я группа - отрицательный контроль 0,34 0,32 = 0,30 S 0,28 £ 0,26 I 0,24 Н 0,22 I 0,20 S 0,18 8 0,16 S 0,14 g 0,12 0,10 Hl 1 0,08 11 N lllll.i 1 2 3 1-7 дней после последней иммунизации; 2-24 ч до начала челленджа; 3-24 ч после последнего челленджирования * достоверное отличие от 5-й группы (р<0,05) # достоверное отличие от 1-й группы (р<0,05) Рис. 5. Уровни анти-Derp IgG2a (M±m) в индивидуальных сыворотках мышей BALB/c с АР, получавших экспериментальную АСИТ D1 или sD1 (разведение сывороток 1:400) При гистологической оценке общая картина воспаления, слизистая экссудация, гиперплазия слизистой оболочки были существенно более выражены в 1-й и 2-й группах по сравнению с группой отрицательного контроля (5-я группа). В то же время во 2-й группе наблюдалась тенденция к снижению вышеназванных показателей. Вместе с тем в 3-й и 4-й группах (АСИТ sD1 и комбинированная п/к и с/л АСИТ sD1) наблюдалось полное подавление этих показателей (рис. 6). 1 - Общая картина воспаления; 2 - Слизистая экссудация; 3 - Гиперплазия слизистой оболочки * достоверное отличие от 5-й группы (р<0,05) # достоверное отличие от 1-й группы (р<0,05) Рис. 6. Гистологические изменения в носовой полости у мышей BALB/c с АР, получавших экспериментальную АСИТ D1 или sD1 Таким образом, экспериментальная АСИТ во 2-й, 3-й и 4-й группах приводила к выраженному снижению морфологической манифестации АР, что определялось снижением степени деструктивных процессов в эпителии носовой полости. По суммарной выраженности лечебного эффекта экспериментальной АСИТ группы можно расположить в следующем порядке 4-я и 3-я группы > 2-я группа. В предыдущих исследованиях нами показано, что экстракт из клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus (D1), химически модифицированный сукцинилированием e-групп лизина и превращенный таким образом в мономерный аллергоид (sD1), обладал существенно меньшей аллергенностью по сравнению с немодифицированным экстрактом (D1). В то же время полученный мономерный аллергоид sD1 продолжал демонстрировать выраженную иммуногенность. При иммунизации мышей мономерным аллергоидом sD1 не отмечалось усиление продукции анти-Der r IgE, однако наблюдалось существенное возрастание анти-Der p IgG1 и IgG2a антительного ответа [12]. Это обстоятельство позволило в данной работе в начальной фазе экспериментальной АСИТ аллергоидом sD1 (3-я, 4-я группы) использовать дозы значительно выше тех, которые применялись при АСИТ немодифицированным D1 (2-я группа), что позволило существенно сократить число инъекций. В результате мы получили некоторое снижение после челленджирования уровней анти-Der p IgE и существенное увеличение анти-Der p IgG1 и IgG2a антительного ответа. В данной работе нами была поставлена цель - оценить эффективность экспериментальной АСИТ мономерным аллергоидом sD1 на мышиной модели аллергического ринита. Нами было предложено несколько вариантов проведения АСИТ на модели ринита: инъекционное (подкожное) введение немодифицированного (нативного экстракта) D1, подкожное введение модифицированного sD1 48 Российский Аллергологический ^^урнал № 6-201 6 АСИТ мономерным аллергоидом из клещей домашней пыли (мономерного аллергоида) и комбинированный вариант - подкожное и сублингвальное введение sD 1. Результаты АСИТ мономерным аллергоидом sD1 сравнивали с группой, получавшей АСИТ нативным экстрактом D1 по схеме, предложенной ранее и являющейся экспериментальным аналогом «полуу-скоренной» схемы (semirush allergen immunotherapy protocol), часто используемой у человека при проведении «классической» инъекционной (подкожной) АСИТ [16, 17]. Парадоксально, но факт, что традиционная («классическая») инъекционная АСИТ аллергенными экстрактами, практикуемая уже более 100 лет, до сих пор используется как «золотой стандарт» при оценке новых препаратов, предназначенных для усовершенствования этого вида лечения [18]. Моделирование ринита проводилось нами экстрактом D1 и включало трехкратную иммунизацию и пятикратное челленджировние выполнением ИНА, что приводило к проявлению признаков АР: наличие немедленной фазы аллергической реакции после контакта с аллергеном (подсчет актов чихания у мышей) и заложенности носа (оценка частоты дыхания). В дальнейшем также оценивались уровни содержания антител в сыворотках крови и наличие гистологических изменений в слизистой оболочке носовой полости, что в сумме позволяет использовать полученные данные для оценки эффективности проведения АСИТ модифицированным клещевым экстрактом. Подсчет частоты чихания у мышей хотя и субъективный, но полезный метод измерения, особенно для тестирования влияния проводимой терапии на механизмы ранней стадии аллергического процесса, например, на высвобождение гистамина [19]. Использованная нами оценка частоты дыхания не является широко распространенным методом (из-за недостаточной распространенности современных неинвазивных плетизмографов), однако известно, что этот показатель хорошо коррелирует с гистаминзависимым ответом и считается аналогичным заложенности носа у человека [20]. Снижение частоты клинических проявлений - один из важных критериев улучшения состояния при АР, и полученные нами данные согласуются с общемировой практикой подобных исследований на мышиных моделях АР [21, 22]. Второй важный аспект, обнаруженный в данном исследовании, это снижение уровня аллерген-специфического IgE и повышение аллерген-специфического IgG1 и IgG2a после инъекционной АСИТ мономерным аллергоидом sD1, что коррелирует с подавлением выраженности клинических симптомов. Это положение согласуется с литературными данными по АСИТ модифицированными аллергенами [23]. Однако в наших экспериментах мы не обнаружили существенного снижения уровня антител изотипа IgE, особенно после челленджирования, в группе (4-я группа), которая получала комбинированную АСИТ sD1 (инъекционную и сублингвальную), что возможно из-за недостаточной дозы sD1 при сублингвальном введении. Считается, что сублингвальная доза должна существенно (в разы) превышать инъекционную дозу при возможно длительном применении. В работе Rask и соавт. приводятся данные, свидетельствующие о том, что наибольшая эффективность сублингвальных препаратов отмечена при длительном ежедневном их введении [24]. Несмотря на отсутствие снижения IgE у мышей 4-й группы, получавших АСИТ аллергоидом sD1 по комбинированной схеме, у них не наблюдались гистологические признаки воспаления носовой полости, что считается показателем улучшения в аналогичных экспериментальных работах [22]. Считается, что АР и астма не являются типичными проявлениями для животных. Так как у многих видов животных аллергическая реакция явно проявляется только на поверхности кожных покровов и слизистых, то, возможно, заболевания дыхательных путей играют у животных скорее триггерную роль в развитии дерматита. Однако специальными методическими приемами удалось воспроизвести на определенных видах млекопитающих признаки патологии, наблюдаемой у человека при рините и астме, причем ввиду наличия видовых особенностей набор этих признаков у разных представителей млекопитающих будет свой. Такие модели крайне необходимы для доклинического изучения безопасности и эффективности новых противоаллергических средств, включая те, которые разрабатываются для аллерген-специфической иммунотерапии. Одной из важнейших характеристик любого лекарственного средства является его безопасность. У препаратов аллергоидов она прежде всего обеспечивается сниженной аллергенностью, то есть неспособностью модифицированного аллергена связывать аллерген-специфический IgE на поверхности клеток-мишеней аллергии (в основном тучных клеток и базофилов) и запускать каскад аллергических реакций. Следует отметить тот факт, что используемые аллергенные экстракты вызывают местные и системные побочные реакции. Так, по данным Nacaroglu и соавт., местные побочные реакции при инъекционной АСИТ нативными аллергенными экстрактами составляли 0,38%, а системные - 0,1% (на 14 308 инъекций), причем местные реакции наблюдались в основном в фазе наращивания дозы, тогда как системные - при поддерживающей дозе. Кроме того, отмечено, что побочные реакции чаще наблюдались у пациентов, получавших АСИТ аллерговакцинами из клещей Российский Аллергологический ^^урнал № 6-2016 49 Оригинальные статьи домашней пыли, содержащими несколько компонентов аллергенных экстрактов [25]. Вместе с тем, по данным Американской академии аллергии, астмы и иммунологии (American Academy of Allergy, Asthma and Immunology) и Американского колледжа астмы, аллергии и иммунологии (American College of Asthma, Allergy and Immunology), в период с 2008-го по 2013 г. зарегистрированы 4 смертельных случая от АСИТ на 28 млн инъекций. Общий процент системных реакций при инъекционной АСИТ составил 1,9%, тогда как при сублингвальной АСИТ - 1,4% [26]. Приведенные данные по побочным реакциям при АСИТ свидетельствуют о том, что разработка новых безопасных и эффективных аллерговакцин более чем востребована. В данном исследовании мы наблюдали местные побочные реакции при подкожном введении высоких доз нативного экстракта D1 во 2-й группе, получавшей АСИТ немодифицированным D1. В то же время в 3-й и 4-й группах, получавших инъекции мономерного аллергоида sD1, не отмечено ни местных, ни системных реакций на всем протяжении курса АСИТ. Это свидетельствует о преимуществе аллергоидной формы перед нативным аллергенным экстрактом с точки зрения безопасности. Кроме этого, преимущество мономерного аллергоида заключается также и в его эффективности, которая достигается меньшим числом инъекций. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что АСИТ мономерным аллергоидом из клещей домашней пыли D. pteronyssinus, полученным методом сукцинилирования, может быть эффективным и безопасным подходом к терапии АР, включая проведение комбинированного курса инъекционной и сублингвальной АСИТ, что может повысить эффект лечения и в конечном счете - качество жизни пациентов.

About the authors

A A Laskin

Institute of Immunology

Moscow, Russia

A A Babakhin

Institute of Immunology

Email: alexbabahin@list.ru
Moscow, Russia

O Y Kamishnikov

Institute of Immunology

Moscow, Russia

I S Gushchin

Institute of Immunology

Moscow, Russia

M R Khaitov

Institute of Immunology

Moscow, Russia

References

Supplementary files