Dynamics of bacterial antibodies of adults and children in mucosal applying therapeutic vaccine immunovak VP-4

Abstract

Full Text

Одним из приоритетных направлений современной иммунотерапии и профилактики заболеваний инфекционной этиологии является применение бактериальных терапевтических вакцин, так называемых поликомпо - нентных бактериальных вакцин, содержащих лизаты наиболее распространенных условно - патогенных возбудителей гнойно - воспалительных процессов - E. coli, S. aureus, S. pyogenes, H. influenzae, K. рneumoniae, P. vulgaris и др. (1, 2, 3). Учитывая, что 90% патогенов проникает в организм через слизистые, становится очевидным перспективность разработки и применения методов мукозальной иммунизации, как наиболее физиологичного способа приобретения специфической устойчивости к инфекционным заболеваниям (4). Первая отечественная бактериальная терапевтическая по - ликомпонентная вакцина «Иммуновак ВП - 4», созданная сотрудниками Института вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова под руководством проф. Егоровой Н.Б., предназначена для терапии и профилактики воспалительных за болеваний органов дыхания и включает в себя лизаты четырех условно - патогенных микроорганизмов: S. aureus, K. pneumoniae, P. vulgaris, E. coli. Разработана специальная назально - оральная схема применения вакцины, дающая высокий профилактический и терапевтический эффект при различных нозологических формах инфекционных заболеваний. Для повышения эффективности терапии и выбора критерия её применения необходимо оценить специфический иммунный ответ к составляющим бактериальным антигенам, и не только в сыворотке, но и в слюне и назальном секрете. Это особенно важно при оценке эффективности местной комбинированной схемы применения вакцины - пероральной в сочетании с интраназальной, так как в этом случае в процесс формирования поствакцинального ответа активно вовлекаются все факторы местной иммунологической системы. Целью нашей работы являлось изучение динамики специфических антител различных изотипов в сыворотке, слюне и назальном секрете 90 Р оссийский.^Аллергический ^Журнал Динамика бактериальных антител у взрослых и детей при местном применении терапевтической вакцины Иммуновак - ВП - 4 взрослых и детей к антигенам S. aureus и Kl. pneumoniae при местном применении первой отечественной поликомпонентной вакцины Иммуновак ВП - 4. Материалы и методы. Наблюдали группу больных (11 чел.) в возрасте 18 - 50 лет с хроническим рецидивирующим фурункулёзом и хроническими очагами бактериальной инфекции ЛОР - органов и группу детей в возрасте 5 - 11 лет (10 чел.) с бронхо - легочными заболеваниями, частыми эпизодами ОРВИ, заболеваниями ЛОР органов, получавших вакцину ВП - 4 назально - орально согласно инструкции по применению. Дважды (до и через 0,5 - 1,5 месяца после последнего приема препарата) с помощью твердофазного ИФА оценивали уровень специфических антител различных изотипов в сыворотке, слюне и назальном секрете к антигенам S.aureus и Kl.pneumoniae, входящим в состав вакцины. На полистироловые планшеты сорбировали очищенные белково - полисахаридные препарата клеточной стенки S. aureus или K^neumoniae, инкубировали с исследуемыми биообразцами, связавшиеся антитела выявляли конъюгатами моноклональных антител против соответствующего класса иммуноглобулинов человека фирмы «ООО По - лигност» Санкт-Петербург. Предварительно образцы полученного назального секрета стандартизовались по массе (50 мг/мл) и их начальное разведение при этом принималось как 1: 20, исходя из среднего удельного веса назального секрета - около 1 г/мл. Каждый биообразец титровали с шагом 2, величина уровня антител в образцах равнялось значению обратного титра, дающего величину оптической плотности равную 0,3. Для определения титров антител, специфичных к S. аureus G - изотипа, сыворотку титровали с разведения 1: 1000, для А - изотипа - с 1: 500, М - изотипа - с 1: 100, - к K. рneumoniae её титровали, соответственно, для G - изотипа с 1: 100, А и М - изоти - пов - с 1: 10. Для оценки уровня бактериальных антител в слюне методом ИФА её титровали с разведения 1: 2. При работе со стандартизованным по весу (50 млг/мл) назальным секретом его начинали титровать с разведения 1: 2, что в реальности соответствовало разведению 1: 40. Результаты обрабатывались методами непара метрической статистики с помощью программы «STATISTICA 6», данные представлены в виде медианы (Ме). Значимость различий величин в каждой группе до и после лечения оценивали по критерию Вилкоксона для зависимых групп (р<0,1). Результаты. Значения титров бактериальных антител колебались в зависимости от их изотипа, природы антигена и вида биоматериала. Уровень антител взрослых и детей всех изотипов к S.aureus был на порядок выше, чем к K^neumoniae. В сыворотке титры антител G - изотипа более чем в 10 раз превышали соответствующие титры антител А - изотипа, а титры антител М - изотипа были более чем в 10 раз ниже титров А - изотипа. В результате курса комбинированной назально - оральной вакцинотерапии у взрослых из всех исследуемых показателей статистически значимо изменился только уровень IgA - антител к обоим антигенам в слюне: стафилококковые антитела увеличились (р=0,07) с Ме=34,5 до Ме=41,5, а антитела к Kl. рneumoniae (р=0,03) - с Ме=9,0 до Ме=16,0. При этом титры бактериальных антител G - и M - изотипов в слюне и G -, А - и M - изотипов в сыворотке и назальном секрете, до и после вакцинации статистически значимо не различались. После вакцинотерапии у детей было выявлено статистически значимое повышение в сыворотке уровня IgA - антител к обоим антигенам более чем в 2 раза: стафилококковые антитела увеличились (р=0,04) с Ме=500,0 до Ме=1358,0, а антитела к Kl. рneumoniae (р=0,02) - с Ме=24,0 до Ме=71,0. Уровень антител G - изотипа возрос, хотя и незначительно, только в отношении стафилококка (р=0,05) - с Ме=10091,5 до Ме=11258,0, а для IgG - антител к Kl^neumoniae наблюдали лишь тенденцию к повышению - Ме возросла с 186,0 до 297,5 (р=0,1). Антитела М - и - зотипа к обоим антигенам в сыворотке значимо не изменялись. В слюне у детей статистически значимо повышался уровень антител А - изотипа к обоим антигенам: к S. аш^т с Ме=15,0 до 31,5 (р=0,03), и с Ме=4,0 до Ме=7,0 (р=0,03) к клебси - еллёзному антигену; титры антител G - изотипа были на порядок ниже и значимо не менялись. Такая же динамика антител G - и А - изотипов у детей наблюдалась в назальном секрете - статистически значимое повышение было выявлено Р оссийский Аллергический Журнал 91 Сизякина Л.П, Андреева И.И, Кролевец Д.И. только для стафилококковых и клебсиеллёзных антител IgA - изотипа: с 648,0 до 938,0 (р=0,04) и с 86,0 до 104,0 (р=0,01), соответственно. Проведенное исследование выявило, что при назально - оральном введении вакцины ВП - 4 у взрослого контингента из всех исследованных параметров статистически значимо изменялся (увеличивался) только уровень антибактериальных IgA - антител в слюне. В то время как у детей при местной схеме вакцинации значимо повышался не только уровень антибактериальных антител А - изотипа в слюне и назальном секрете, но и статистически значимо возрастал уровень бактериальных антител в сыворотке к обоим антигенам, причем как А -, так и G - изотипа. Это свидетельствует о различных механизмах воздействия местной вакцинации на иммунную систему взрослых и детей: у взрослого контингента стимулировался только местный антимикробный иммунитет, в то время как у детей был задействован и системный иммунный ответ. Полученные данные выявили значительную эффективность местного применения вакцины ВП - 4 для взрослых в отношении формирования мукозального антибактериального иммунитета и для детей в плане активации широкого антибактериального местного и системного иммунного ответа.