Comparative assessment of the protein and antigenic profiles of allergens

Abstract

Full Text

Среди актуальных разделов современной медицины аллергология представляет проблему глобального значения. Специалисты в области аллергологии во всем мире отмеча ют большой рост числа людей, страдающими аллергическими заболеваниями. По данным экспертов ВОЗ у 25% населения земного шара диагностируются аллергические заболевания. Р оссийский.^Аллергический ^Журнал 67 Невская Л.В., Лавренчик Е.А., Вдовиченко М.В., Жданова М.Ю. Наиболее эффективным способом лечения аллергических заболеваний является аллер - генспецифическая иммунотерапия (АСИТ), проводимая с помощью причинно - значимого аллергена. для выявления этого аллергена в проводят специфическую диагностику [1]. Российскими предприятиями (ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ, ПАО «Биомед» имени И.И. Мечникова) выпускается около 70 наименований препаратов аллергенов как лечебных, так и диагностических, представляющих собой водно - солевые растворы для инъекций [2]. Эффективность и безопасность препаратов аллергенов значительной степени определяется, качеством их стандартизации [3]. Основными показателями качества отечественных препаратов аллергенов, определяющими их эффективность, являются содержание белкового азота, подлинность, специфическая активность. Европейская Фармакопея содержит также рекомендации по оценке белкового и антигенного профилей препаратов аллергенов с помощью таких методов, как изоэлектриче - ское фокусирование, электрофорез с натрия додецилсульфатом в полиакриламидном геле, иммуноэлектрофорез, капиллярный электрофорез, масс - спектрометрия [4, 5]. Такой подход связан с тем, что препараты аллергенов, получаемые из природных источников, представляют собой сложный комплекс, содержащий, в том числе, белковые компоненты, как обладающие, так и не обладающие аллергенными свойствами [6, 7, 8, 9]. Целью настоящей работы является оценка применимости методов изоэлетрофокусиро - вания и электрофореза для изучения качества препаратов аллергенов, полученных из природного сырья. Было изучено 60 серий препаратов аллергенов и аллергоидов из пыльцы трав и деревьев (тимофеевки луговой, ежи сборной, овсяницы луговой, полыни горькой, амброзии полыннолистной, березы висячей) производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, с помощью следующих методов: изоэлектрофокусирование (ИЭФ), электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии до - децилсульфата натрия (ДСН - ПААГ), перекрестный иммуноэлетрофорез (ПИЭФ) с использованием специфических кроличьих сывороток к аллергенам и аллергоидам. Препараты аллергенов и аллергоидов были подвергнуты диализу для удаления солей, фенола и формальдегида. Метод ИЭФ был использован для сравнительной оценки белкового профиля одноименных аллергенов и аллергоидов разных серий одного наименования препарата. Отмечено, что 60 % выявленных белковых компонентов имели точку изоэлектрофокусирования в диапазоне рН от 4,0 до 7,0, что характерно для многих аллергенов [10]. Было установлено, что белковые компоненты аллергоидов были распределены в более узкой зоне рН (3,5 - 4,5) по сравнению с аллергенами. Обнаружено, что содержание белковых компонентов в аллергоидах в 2,3 раза ниже, чем в одноименных аллергенах. При исследовании образцов разных серий препаратов выявлены различия в наборе белковых компонентов. диапазон гетерогенности белкового состава между сериями колебался в пределах 12 - 60 %, что может объяснено неоднородностью природного сырья, используемого для приготовления препаратов аллергенов одного наименования [2]. Наименьшее различие в составе белков выявлено между сериями аллергена из пыльцы амброзии полыннолистной (12 %). Максимальная гетерогенность состава выявлена в сериях аллергена из пыльцы ежи сборной (53 %). Молекулярная масса белковых компонентов в препаратах была изучена с помощью электрофореза ДСН - ПААГ в восстанавливающих условиях. Выявлено, что белки, содержащиеся в препаратах аллергенов, в процессе электрофореза разделялись на ряд полос, молекулярный вес которых, оцененный по стандартам масс, соответствовал стандартным белкам, присутствующим в аллергене определенного наименования [11]. Суммарная молекулярная масса белковых компонентов аллергоидов была на 50% выше, чем у одноименных аллергенов, что объясняется, по - видимому, полимеризацией молекул аллергена, вследствие химической модификации. По мнению некоторых авторов, именно полимеризированные молекулы аллергоида обуславливают высокую активность стимулирования блокирующих антител [12]. 68 Р оссийский.^Аллергический ^Журнал Сравнительная оценка белкового и антигенного профилей препаратов аллергенов. Антигенный профиль аллергенов и аллерго - идов был изучен методом перекрестного иммуноэлектрофореза (ПИЭФ). Обнаружно, что по сравнению с аллергоидами антигенный спектр одноименных аллергенов состоит из большего числа компонентов (у аллергенов было выявлено на 50 % больше линий преципитаций с гомологичной сывороткой, чем у аллергоидов). При проведении ПИЭФ с гетерологичными сыворотками (антиаллергоидные для аллергенов и антиаллергенные для аллергоидов) пики преципитации у одноименных аллергенов и аллергоидов совпали в 75 % случаев. Вероятно, это можно объяснить присутствием различных антигенных детерменант у аллергенов и аллергоидов. Это может служить объяснением сохранения способности аллергоида стимулировать выработку антител, специфичных к исходному аллергену, у лабораторных животных. Таким образом показано, что методы изоэле - трофокусирования и электрофореза позволяют не только оценить белковый и антигенный состав исследуемых препаратов аллергенов, но и выявить различия между аллергенами и ал - лергоидами, что позволяет рекомендовать применение этих методов для оценки белкового профиля стандартных образцов аллергенов, как предусмотрено требованиями, описанными в ГФ XIII (ОФС «Аллергены») [13].