ESPECIALLY THE EXPRESSION OF MEMBRANE MARKERS OF B-LYMPHOCYTES IN SEROPOSITIVE OPTION, THE CURRENT ARTICULAR AND VISCERAL FORM OF RHEUMATOID ARTHRITIS

Abstract

Full Text

Ревматоидный артрит (РА) - хроническое прогрессирующее заболевание, связанное с персистированием аутоиммуннного воспаления в синовиальной оболочке и прогрессирующим поражением суставов в виде деструкции хрящевой ткани. [1]. В основе РА лежат сложные нарушения иммунного ответа, вследствие которых развивается самоподдерживаюшееся хроническое воспаление. Развитие и поддержание воспалительной реакции происходит в результате нарушения скоординированности процессов активации и супрессии иммунокомпетентных клеток. Одним из ключевых моментов в развитии иммунопатогенеза РА отводится роли В-лимфоцитам. Данные клетки характеризуются дефектом процесса толерантности, регулируют активность Т-лимфо-цитов, продуцируют цитокины, антитела, в частности аутоантитела, которые, активируя систему комплемента и лимфоциты, индуцируют воспаление и деструкцию тканей организма. [1, 3, 4]. Целью работы является изучение особенностей иммунофенотипа В-лимфоцитов на разных этапах иммуногенеза, при серопозитивном варианте течения суставной и висцеральной формы РА. Материалы и методы. Обследовано 28 пациентов с серопозитивным вариантом суставной и висцеральной формой РА, в стадии обострения, вторая степень активности, медленопрогресси-рующее течение. Средний возраст обследуемых 53±5 года. Диагноз устанавливался на основании диагностических критериев Американской ревматологической ассоциации 1987 года и классификации Ассоциации ревматологов России 2007 года. Пациенты были разделены на две группы по вариантам течения. Первую группу составили 17 больных, с суставной формой течения РА. Вторую группу - 11 больных с висцеральной формой, находившихся на стационарном лечении в кардиологическом отделении клиники ФГБУ ВО «РосГМУ». Контрольную группу составили 10 практически здоровых доноров в возрасте 40-50 лет. Фенотипический анализ В-лимфоцитов включал в себя определение экспрессии мембранных антигенов: CD19+CD5+CD45+ (В-1лим-фоциты), CD19+CD5-CD45+ (зрелые В-2), CD19+CD45RA+CD27-CD45+ (наивные В-2), CD19+CD45RA-CD27+ CD45+ (В- клетки памяти), Р оссийский .^Аллергический ^Журнал 177 Харитонова М.В., Сизякина Л.П., Соболева Т.Н. CD19+CD23+CD45, CD19+CD25+CD45+ (маркеры ранней активации), CD19+CD40+CD45+, CD19+CD86+CD45+(ко-стимулирующие молекулы), CD19+An+CD45, CD19+CD95+CD45+ (готовность В-лимфоцитов к апоптозу), а также CD3+CD4+CD40L+CD45+ (лиганд для взаимодействия Т-лимфоцитов с В-клетками), в реакции непрямой иммунофлюоресценции, с учетом результатов на проточном лазерном цитофлуо-риметре марки «FC 500». Уровень сывороточных иммуноглобулинов классов A,M,G оценивали в реакции радиальной иммунодифффузии в геле по Манчини, (Manchini et al., 1965г.) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом селективной преципитации в полиэтиленгликоле 6000 (ПЭГ) (Гриневич Ю.А. с соавт., 1981). Математическую обработку полученных данных проводили на ПК Microsoft Windows XP professional, используя программу «Statistica 7.0». Достоверность различий в группах оценивали с помощью непараметрических критериев Манна-Уитни и Вилкоксона. Достоверными считались результаты при p<0,05. Результаты и обсуждение. При анализе содержания В-лимфоцитов в группе пациентов с серопозитивным вариантом суставной формы РА по сравнению с группой контроля, выявлено статистически достоверное увеличение популяции В1-лимфоцитов с фенотипом CD19+CD5+CD3-CD45+ (0,47±0,08% и 0,12 ±0,03%), тогда как содержание В2-клеток с иммунофенотипом CD19+CD5-CD3-CD45+ у данных пациентов не отличалось от репрезентативных значений. При изучении степени зрелости В-клеток, выявлено увеличение количества наивных В2 - клеток с фенотипом CD19+CD45RA+CD27-CD45+ (7,7±0.7% и 5,6±0,46%), тогда как клетки памяти CD19+CD45RA-CD27+ CD45+% не отличались от донорских значений. Процесс активации В2 - лимфоцитов определяется экспрессией мембранных структур, обеспечивающих проведение сигнальных путей для медиаторов, обладающих активирующим воздействием. Анализ активационных маркеров выявил увеличение экспрессии на В2-клетках маркеров ранней CD19+CD23+CD45 (1,64±,2% и 0,91 ±0,14%), CD19+CD25+CD45+ (0,5±0,1% и 0,05±0,01%) активации и молекул адгезии CD19+CD86+CD45+ (0,70±0,2% и 0,1±0,01%). При анализе Т-В-клеточной кооперации осуществляющейся через костимулирующий сигнал и представленный системой CD40L и CD40 при суставной форме серопозитивного РА выявлено увеличение экспрессии костимулирующей молекулы CD19+CD40+CD45+ ( 9,3±0,74% и 7,02 ±0,42%) на В2 лимфоцитах и CD40L лиганда на Т- хелперах CD3+CD4+CD45+ ( 0,80±0,17% и 0,3 ±0,05%). При оценке процесса элиминации активированных клеток выявлено увеличение экспрессии рецептора CD19+CD95-CD45+ готовности к апоптозу (0,80±0,13% и 0,33 ±0,03% соответственно) и количеством апоптотирующих В-клеток CD19+An+CD45+ (0,9±0,10% и ,50 ±0,03%) в реакции с анексинном -V. Суммарная интеграция работы В-1и В-2 клеток привела к повышению синтеза сывороточных иммуноглобулинов классов ^А, ^М (^А 2,3±0,10 г\л и 1,13±0,01г\л, ^М-(1,3±0,06 г\л и 1,07±0,02г\л соответственно). При висцеральной форме серопозитивного варианта течения РА установлено увеличение относительного количества минорной субпопуляции с фенотипом В1- лимфоцитов CD19+CD5+CD3-CD45+ (0,6±0,01% и 0,12 ±0,03соответственно). При изучении процессов дифференцировки и созревания В2 - клеток выявлено статистически достоверное увеличение относительного количества зрелых CD19+CD5-CD3-CD45+ (16,4±1,2% и 7,9±0,5% соответственно) и наивных В2 клеток CD19+CD45RA+CD27-CD45+ (11,8±0.9% и 5,7±0,5%) по сравнению с группой контроля. Исследование поверхностных маркеров В2 - лимфоцитов ответственных за восприятие и проведение активационных сигналов было выявлено увеличение экспрессии маркеров ранней активации CD19+CD23+CD45+ (2,9±0,08% и 0,91±0,14%) ,CD19+CD25+CD45+ (1,6±0,4% и 0,05±0,01% соответственно). При этом отмечается усилением экспрессии костимулирующей CD19+CD40+ (19 ± 1,3% и 7,0 ±0,42%) молекулы на В-клетках и CD40L (0,9 ± 0,2% и 0,3 ±0,05% соответственно) лиганда на субпопуляции Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+CD4+CD45+. Процесс удаления активированных клеток при висцеральной форме РА характеризовался усилением экспрессии на В-2 лимфоцитах молекул апоптоза CD19+CD95+CD45+ (1,1±0,2% и 0,3±0,03% соответственно). В гуморальном звене иммунной системы наблюдается статистически достоверное повышение содержания сывороточных иммуноглобулинов классов ^А (2,3±0,1 г\л и 1,13±0,01г\л) и IgМ-(1,3±0,08 г\л и 1,07±0,02г\л), а также количество циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) 107,5±11,1 у.е. (70±10у.е.), что свидетельствует об активации плазматических клеток. Таким образом при сравнительном анализе относительного количества и иммунофенотипа 178 Р оссийский .^Аллергический ^Журнал Особенности экспрессии мембранных маркёров В-лимфоцитов при серопозитивном варианте течения суставной и висцеральной _j_форме ревматоидного артрита. В1 и В2 - лимфоцитов, в группах с различными формами РА установлено, что относительное количество В1-клеток имеет тенденцию к увеличению при висцеральной форме РА. Данные клетки потенциально аутореактивные, обладающие ограниченным репертуаром и низким сродством своих иммуноглобулиновых рецепторов к антигенам, что позволяет им перекрестно реагировать со многими сходными детерминантами. [3, 5]. При анализе зрелых и наивных В -2 лимфоцитов выявлено статистически достоверное увеличение их при висцеральной форме РА, что свидетельствует об усилении процессов созревания В-клеток, готовности полноценно распознавать антиген с последующей дифференцировкой их в плазматические клетки и синтез иммуноглобулинов. [2]. Процесс активации В-2 клеток характеризуется усилением экспрессии ранних активационных маркеров, костимулирующей молекулы и соответствующего лиганда при висцеральной форме серопозитивного РА, что соответствует тяжести заболевания.