THE FEATURES OF APOPTIC ACTIVITY OF PATIENTS WITH HERPES INFECTIONS (1, 2 TYPES) AND PAPILLOMAVIRUS INFECTION WITH HIGH ONCOGENIC RISK

Abstract

Full Text

В современной медицине особую значимость имеет факт обнаружения роли интегративных вирусов, вызывающих хронические инфекции (герпетическая и папилломавирусная инфекции) в онкогенезе. Наиболее существенная роль в его развитии отводится вирусу папилломы человека (HPV, ВПЧ) 16 и18 серотипов, являющихся вероятной причиной возникновения рака шейки матки в 41% и 16% случаев соответственно, к высокоонкогенным серотипам относятся также ВПЧ 18,31,35,58 серотипы [1, 2]. Вирусы способны оказывать иммуносупрессивное действие, направленность которого может быть связана как с клеточным иммунитетом, так и с нарушением синтеза цитокинов и снижением апоптической активности зараженных клеток [3, 4]. Особенно актуальной является проблема развития процесса вирогении в случае таких хронических вирусных инфекций как вирусные гепатиты В, С, папилломавирусные, герпетические инфекции, когда, несмотря не отсутствие активной репликации вируса, клетки макроорганизма «заражены» геномом вируса [2]. Перспективной задачей современной иммунологии является поиск путей модуляции механизма работы клеток в направлении регуляции апоптоза [1]. Однако, первоначальной задачей является определение особенностей цитокинов и их лигандов, задействованных в регуляции процессов апоптоза. Целью исследования было изучение особен ностей иммуноцитокинового профиля крови пациентов с герпетической и папилломавирусной инфекцией. Материалы и методы. Под наблюдением находилось 70 пациентов с хронической рецидивирующей генитальной герпес-вирусной инфекцией (ВПГ-1,2). Критериями выбора пациентов для обследования являлись: 1) наличие различной частоты рецидивов генитального герпеса - от 2 до 12 и более раз в год; 2) продолжительность генитальной герпес-вирусной инфекции более одного года; 3) обследование в фазе обострения процесса или в периоде продромы, не более 48 часов от момента появления высыпаний; 4) отсутствие приема иммуномодулирующей терапии в течение последних 3 месяцев. Диагноз ВПГ-1,2 верифицирован на основании клинической картины и данных лабораторного обследования, согласно рекомендациям 5-го международного форума (IHMF-1997) по диагностике генитального герпеса. По тяжести клинического течения ВПГ- 1,2 инфекции легкая форма (1-2 рецидива в год) диагностирована у 10 пациентов (22,5 %) исследуемой группы, средняя (3-5 рецидива в год) - у 40 (70,83 %), тяжелая (6-12 и более рецидивов в год) - у 20(6,67 %). Помимо пациентов с герпетической инфекцией под наблюдением находились больные с па-пилломавирусной инфекцией (ВПЧ высокого он-когенного риска, 16,18 типы) (94 человека, из них Р оссийский .^Аллергический ^Журнал 175 Хараева З.Ф., Сижажева О.А. 16 мужчин, 78 женщин в возрасте от 19 до 44 лет). У пациентов ВПЧ-инфекция подтверждалась ПЦР-анализом. Цитологические изменения при кольпоскопии у женщин с ВПЧ высокого онко-генного риска (койлоцитарная атипия, наличие в мазках двухъядерных и многоядерных клеток, амфофилия цитоплазмы и пр.) были обнаружены у 48 пациенток. Анализ ранее проводимой терапии обследованных пациентов показал, что 48,3% пациентов комплексную терапию не получали. Оценку содержания сывороточного растворимого Fas-рецептора (sFasl) проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием стандартной тест-системы human sAPO-1/Fas ELISA BMS245 (Bender MedSystems). Определение уровня TRAIL в сыворотке крови также проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием стандартной тест-системы human TRAIL ELISA (Biosource). Исследование уровня фактора некроза опухоли а (ФНОа) в сыворотке крови пациентов проводили с помощью тест-системы «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург, Россия). Все пробы исследовались в динамике (в течение 30 дней): с момента поступления в стационар (или рецидива инфекции) и спустя месяц после проводимой комплексной терапии (с подключением ациклических нуклеозидов и иммуномодуляторов - препараты интерферонов, индукторы интерферонов). Статистическую обработку и расчет корреляционного коэффициента проводили с использованием программы Microsoft Excel. Результаты и обсуждение. Для оценки активности апоптоза были исследованы ФНО-зависи-мые лиганды TRAIL, sFasl, ФНО-а у пациентов с хроническими герпетическими инфекциями (ВПГ-1,2), папилломавирусной инфекцией высокого онкогенного риска. У пациентов с ВПГ 1,2- инфекцией отмечалось повышение уровня sFasl в момент рецидива при: легкой степени на 42%, средней степени тяжести на 35%, тяжёлой степени на 26%. При ВПЧ-16,18 типа sFasl в момент рецидива снижен на 22% по сравнению с донорской группой. Через 30 суток с момента лечения изменений не отмечалось. Сниженное количество sFas приводит к уменьшению возможности клетки запустить апоптоз и, таким образом, увеличению способности к персистен-ции интрегративных вирусов. Возможно, одним из механизмов антиапоптической активности является описанная в литературе способность папилломавирусов взаимодействать с геном р53 и подавлять транскрипционную активность белков, входящих в состав Fas. Сывороточные концентрации TRAIL в изученных группах пациентов с герпетической и папил-ломавирусной инфекцией оказались достоверно ниже показателей доноров (p<0,001). Обращают на себя внимание выявленная тенденция к снижению TRAIL в сыворотке крови в случаях с более тяжелым течением инфекционного процесса. Резко сниженные показатели у пациентов с ВПЧ высокого онкогенного риска приводят к заключению о том, что отсутствие TRAIL-рецепторного апоптоза может быть одной из причин онкогенеза. Уровень ФНО-а в момент рецидива герпетической инфекции значительно повышался, сохраняясь высоким через 30 суток с момента лечения (p<0,001). Значения ФНО-а коррелировали со степенью тяжести заболевания при ВПГ-1,2 типа (k-0,85). При ВПЧ высокого онкогенного риска ФНО-а повысился на 90,0±3,5%, достоверного снижения ФНО-а на фоне комплексной противовирусной терапии не зарегистрировано. Таким образом, среди всех изученных групп пациентов наиболее снижена возможность организма элиминировать интегративный вирус у пациентов с ВПЧ высокого онкогенного риска (16,18 типа), что выявлено по сниженному уровню растворимого лиганда к sFas-рецептору и TRAIL. ФНО-а зависимые пути противовирусной защиты активированы во всех исследуемых группах больных с хроническими вирусными инфекциями, при этом уровень ФНО-а коррелирует с тяжестью течения инфекционного процесса. что позволяет использовать его в качестве диагностического критерия при скрытых инфекциях.