POLYMORPHISM OF TOLL-LIKE CELL RECEPTORS (TLR2, TLR4) AND CYTOKINE LEVELS IN PATIENTS WITH ATOPIC DERMATITIS

Abstract

Full Text

Молекулярно-генетические исследования, проведённые за последние два десятилетия, показали, что в основе формирования атопического фенотипа участвуют несколько сотен генных мутаций [1, 2]. При атопическом дерматите (АтД) выявлены существенные ассоциации с полиморфизмом генов, участвующих в формировании эпидермального барьера, иммунных реакций и их регуляции [2]. Не меньшую актуальность представляют исследования, касающиеся изучения связи различных полиморфных ва риантов генов, контролирующих врождённые и адаптивные иммунные реакции в патогенезе аллергических заболеваний. Нарушение барьерной функции кожи - один из значимых факторов в патогенезе атопического дерматита, что признаётся большинством исследователей. Толл-подобные рецепторы (TLR) являются одной из групп рецепторов в системе иммунного ответа, которые участвуют в воспалительных реакциях различных типов клеток на микробные антигены [3]. Установлено, что клеточные рецеп оссиискии .^Аллергический ^Журн 151 Фассахов Р.С., Тюрин Ю.А., Решетникова И.Д., Агафонова Е.В., Ризванов А.А., Шарифуллина А.А. торы TLR2 и TLR4 участвуют в формировании реакций врождённого и адаптивного иммунитета к липотейхоевым кислотам клеточной стенки грамположительных бактерий, вирусным белкам, ЛПС грамотрицательных бактерий [4]. Показана клиническая значимость мутаций rs5743708 (с.2258 G^) толл-подобного рецептора 2 типа, характеризующаяся заменой в гене tlr2 в 2258 нуклеотиде от стартового кодона азотистого онования гуанина на аденин (миссенс мутация), что приводит к изменению первичной аминокислотной последовательности в 753 позиции с заменой аргинина Arg на глутамин Gln. Исследования участия различных полиморфных вариантов генов, контролирующих врождённые и адаптивные иммунные реакции, в патогенезе атопического дерматита (АтД) представляются актуальными. Полиморфизм rs5743708 гена TLR 2, характеризующийся заменой кодона гуанина (G) на аденин (A), и приводящий к замене Arg на Gln в 753 положении, приводит к нарушению активации клеток через TLR2-сигнальный путь. В связи с этим нам представилось интересным изучить связь полиморфизма генов tlr2 и tlr4, кодирующих рецепторы TLR2 и TLR4, с уровнем ци-токинов у больных АД. Материалы и методы. В исследование были включены биологические образцы, полученные от 50 человек с АД (5-35 лет). Контроль - 100 человек, не страдающих аллергического заболеваниями. Полиморфизм генов TLR2 (p.Arg753Gln) и TLR4 (Asp299Gly) рецепторов определяли методом ПЦР с электрофоретической детекцией («Литех», Россия). Геномную ДНК выделяли из лейкоцитов цельной крови и из клеток щечного эпителия («ДНК-экспресс» НПО «Литех», Россия). Уровень IL-1, IL2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFN у определяли в ИФА - («Вектор-Бест», Россия). Статистическая обработка: распределение генотипов по критерию х2., значимости различий количественных признаков оценивали с помощью t -теста для неравных дисперсий. Результаты. Генотипы в общей выборке по изученным полиморфизмам генов TLR2 TLR4 рецепторов распределились следующим образом: гомозиготы - 91,63%, гетерозиготы 8,37%, гомозиготы по мутантному аллелю 0%. Распределение частот аллелей и генотипов в исследованных группах соответствовало закону Харди-Вайнбер-га-Кастла, и было равновесным. Распределение частот встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма rs5743708 гена TLR2 рецептора. Среди больных с АД встречаемость гомозиготного генотипа G/G была в 1,17 раза ниже, а гетерозиготного генотипа G/A* - в 3,3 раза выше, по сравнению с группой здоровых лиц. Уровень INF-y в сыворотке крови у больных АД был в 1,5 раза, а уровень ИЛ-1 и ИЛ-2 - в 2 раза ниже в группе больных с гетерозиготным генотипом, тогда как содержание ИЛ-4, 8,10 напротив было выше в 1,4 и 1,8 раза соответственно. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфизма rs5743708 гена TLR4 рецептора в исследованных выборках. Полиморфный гомозиготный генотипа G*/G* у больных и в группе контроля не выявлен. Частоты встречаемости ал-леля А rs4986790 гена TLR4 у больных составила 92,4%, в контроле - 94,0%, а мутантного аллеля G* у больных - 3,5%, в контроле - 4,5%, что также не выявило достоверных различий (p-value х2 > 0,05). В сыворотке крови больных АД уровня INF-y был ниже в 1,6 раза, ИЛ1 и 2 в 1,7 раза в группе гетерозигот, по сравнению с гомозиготами. Уровни ИЛ- 4, 10 и ИЛ- 6, 8 в сыворотке гетерозигот были повышены в 1,3 и 1,6 раза соответственно по сравнению с гомозиготами. Обсуждение. Таким образом, установлена значимость генетических полиморфизмов (p.Arg753Gln, rs5743708) генов TLR 2 и (Asp299Gly, tlr4, rs4986790) TLR 4 в патогенезе дисрегуляции продукции цитокинов клетками, организма экспрессирующими TLR2 и TLR4, осуществляющие регуляцию баланса TH1/TH2/TH17-субпопуля-ций лимфоцитов, участвующих в иммунных реакциях при АтД.