EVALUATION OF SPECIFIC MUCOSAL IMMUNITY TO STAPHYLOCOCCUS AUREUS AND KLEBSIELLA PNEUMONIAE

Abstract

Full Text

Многочисленные исследования последних лет в области специфического антитель-ного ответа к различным патогенам в отделяемом носоглотки показали его большую информативность и перспективность как в качестве диагностического показателя инфекционных заболеваний, так и при оценке эффективности проводимого лечения [1, 2, 3, 4]. Последнее особенно важно при проведении иммунотерапии непарентеральными бактериальными вакцинами: перорально - бронхомунал (Словения), брон-ховаксом (Швейцария), рибомунил (Франция) или интраназально - имудон (Германия), ИРС-19 (Франция) и отечественная вакцина «Иммуно-вак ВП-4», которые действуют преимущественно на систему местного иммунитета верхних отделов респираторного тракта и носоглотки. Хотя они и не вызывают длительного и стойкого протективного иммунитета, но всё же стимулируют специфический антимикробный иммунитет, повышают активность защиты от наиболее распространённых возбудителей гнойно-воспалительных процессов. Следует отметить, что все вышеперечисленные наиболее часто применяемые бактериальные вакцины содержат от 4-х до 19-ти компонентов, среди которых в обязательном порядке присутствуют антигены S. aureus и Kl. pneumoniae. Определение уровня специфических антител к этим двум патогенам в слюне и назальном секрете будет полезным для оценки местного иммунитета при различных состояниях и анализа стимуляции антимикробного иммунного ответа к этим компонентам бактериальных вакцин. Целью нашей работы являлось определение в слюне и назальном секрете уровня IgA- и IgG-антител к S. aureus и Kl. pneumoniae, играющим существенную роль в этиологии воспалительных заболеваний слизистых оболочек и кожи. Материалы и методы. Работа проводилась на 3-х группах пациентов по 20 человек в каждой в возрасте от 18 до 60 лет: • 1-ая группа - практически здоровые лица, контроль; • 2-ая - больные хроническими заболеваниями ЛОР-органов (синуситы, отиты, тонзиллиты); • 3-я - больные хроническим рецидивирующим фурункулезом (ХРФ). Уровень антител в исследуемых образцах оценивали с помощью твердофазного ИФА. На поли-стироловые планшеты сорбировали очищенные белково-полисахаридные комплексные препараты клеточной стенки S. aureus или Kl. рneumoniae, инкубировали с исследуемыми образцами слюны или назального секрета, связавшиеся антитела выявляли конъюгатами моноклональных антител против соответствующего класса иммуноглобулинов человека фирмы «ООО Полигност», Санкт-Петербург. Предварительно образцы назального секрета стандартизовались по массе (50 мг/мл) и их изначальный титр до разведения принимался как 1:20, исходя из среднего удельного веса назального секрета - около 1 г/мл. Каждый образец слюны и назального секрета титровали с разведения 1:2 с шагом 2. Величина уровня антител в образцах выражалась значением обратного титра, дающего величину оптической плотности, равную 0,3. Результаты обрабатывались методами непараметрической статистики с помощью программы «STATISTICA 6», данные представлены в виде медианы (Ме) и интерквартильного размаха от 25 до 75%. Значимость различий величин между группами оценивали по критерию Манн-Уитни. Результаты. Было установлено, что уровень 132 Р оссийский .^Аллергический ^Журнал Оценка специфического мукозального иммунитета к Staphylococcus aureus и Klebsiella pneumoniae специфических антител к S. aureus в слюне и назальном секрете значительно выше, чем - к Kl. pneumoniae, при этом в назальном секрете показатели всех специфических антител были значительно на порядок выше, чем в слюне. В отличие от назального секрета уровень антител А-изоти-па в слюне значительно превышал уровень антител G-изотипа. В группе контроля в слюне уровень анти- S. aureus антител A-изотипа составил - Ме-16,0 (10,0-21,0), у больных ХРФ он равнялся - Ме-101,0 (66,0-128,0), что более чем в 5 раз выше значения в группе контроля (р=0,00001), а у пациентов с ЛОР заболеваниями этот показатель равнялся Ме-39,0 (27,0-114,0) и превышал более чем в 2 раза показатель 1-ой группы (р=0,0002). При этом группы 2 и 3 также статистически значимо различались между собой по уровню стафилококковых IgA антител в слюне (р=0,002). Наивысшее значение IgA антител к S. aureus в слюне отмечалось в группе больных ХРФ, что коррелирует с высоким значением высеваемости у них S. aureus из очагов воспаления - более чем в 90% случаев, хотя его локализация не была связана со слизистыми оболочками. Более низкое значение этого показателя во 2-ой группе больных не свидетельствует о столь высокой, как при ХРФ, ключевой роли S. aureus в патогенезе их заболеваний, хотя его значение также достоверно было выше, чем в группе контроля. Уровень специфических антител к Kl. pneumoniae в слюне пациентов исследуемых групп был более чем в 3 раза ниже уровня стафилококковых антител, при этом медиана обратных титров антител А-изотипа не превышала значения 14. Однако было выявлено статистически значимое отличие этого показателя - Ме- 13.0 (7,0-22.0) в группе ЛОР-больных (р=0,002) и больных ХРФ - Ме-14,0 (8,0-30,0) (р=0,005) от данного показателя группы контроля - Ме-4,0 (3,0-7.0). Во всех трёх группах обследованных пациентов значения обратных титров бактериальных антител G-изотипа были более чем в 2 раза ниже, чем уровень антител А-изотипа. В группе 1 уровень антител G-изотипа к S. aureus составил - Ме-9,0 (4,0-23,0), у пациентов 2-ой группы - Ме-17,0 (8,0-53,0), у больных ХРФ - Ме- 26.0 (9,0-81,0); медиана обратных титров антител G-изотипа к Kl. pneumoniae во всех трёх группах была равна единице. При этом статистически значимого различия между уровнем специфических стафилококковых и клебсиеллезных антител G-изотипа в слюне пациентов всех трёх групп выявлено не было. В назальном секрете уровень бактериальных антител А-изотипа был ниже, чем G- изотипа, при этом значения обратных титров антител А-и-зотипа к S. aureus имели статистически достоверное различие (р=0,05) только между группой 1 -Ме -562,0 (264,0-958,0) и группой больных ХРФ - Ме-798,0 (629,0-2029,0), в то время как в слюне этот показатель достоверно отличался от значения группы контроля для всех групп больных. Также как и в слюне, в назальном секрете были выявлены статистически значимые различия этого показателя между группами 2-3 (р=0,005). Значения обратных титров антител к Kl. pneumoniae в назальном секрете были более чем на порядок ниже по сравнению с уровнем анти-стафилококковых антител. Однако также было выявлено статистически значимое отличие величины медианы обратных титров антител к Kl. pneumoniae А-изотипа в группе больных ХРФ - Ме-140,0 (75,0-265,0), от данного показателя группы 1 - Ме-20,0 (20,0-97,0), (р=0,04), при этом группы 2 и 3 отличались между собой по данному показателю с уровнем значимости р=0,07, а между группами 1 и 2 не было выявлено статистически значимого различия. В отношении антител G-изотипа как к S. aureus, так и к Kl. pneumoniae в назальном секрете не было выявлено статистически значимого отличия по этим показателям двух обследованных группах больных от группы контроля. Проведённый сравнительный анализ показателей обратных титров специфических бактериальных антител в группе контроля и 2-х группах больных установил, что уровень IgA антител к S. aureus и Kl. pneumoniae в слюне и назальном секрете в группе контроля и группе больных ХРФ отличались между собой с высокой степенью статистической значимости. Для ЛОР больных эти же статистически значимые различия с группой контроля были выявлены только в слюне. При этом ни в слюне, ни в назальном секрете не было выявлено статистически значимого различия между группой контроля и какой-либо группой больных в отношении уровня специфических бактериальных антител G-изотипа. Таким образом, уровень специфических антител IgA-изотипа, которые являются основной составляющей гуморального иммунитета слюны и назального секрета и определяют устойчивость слизистых оболочек к инфекции (5), может служить неинвазивным диагностическим критерием инфекционного процесса, а также использоваться при терапевтическом мониторинге заболевания.