COMPARATIVE CHARACTERISTICS OF OPPOSITION CYTOCINES (IL-17A, IL-35), BLOOD SERUM OF PATIENTS WITH ERYTHEMA FORM AND FORM WITHOUT ERYTHEMA I STAGE IXODES TICK BORRELIOSIS

Abstract

Full Text

Иксодовый клещевой боррелиоз (боррели-озная инфекция, Лайм-боррелиоз) - инфекционное трансмиссивное заболевание, вызываемое спирохетами Borrelia burgdorferi sensu lato, передающимися через присасывание клещей рода Ixodes [1]. Боррелиозная инфекция является актуальной проблемой общественного здравоохранения. Среднероссийские показатели заболеваемости иксодовым клещевым боррелиозом за 2010-2015 годы составляют от 4,00 до 7,02 случаев в год, в среднем 5,2±0,44 случаев на 100 000 населения. Заболеваемость боррелиозной инфекцией в Кировской области, расположенной на севере Волго-Вятского региона Российской Федерации, составляет 10,21-35,57 случаев, ежегодно превышая среднероссийские показатели в 2,5-6,6 раз [1, 2]. Цитокины (интерлейкины) являются веществами белковой природы, участвующими в реализации реакций врожденного и адаптивного иммунитета [3]. Цитокины осуществляют межклеточные взаимодействия, играют важную роль в тканевом гомеостазе при воспалении. Взаимодействующие интерлейкины обладают синергическими и антагонистическими свойствами, при этом образуется цитокиновая сеть. Интерлейкины направляют дифференцировку CD4+ клеток в Th1- и Th2-клетки, играют важную роль в реализации типов иммунного ответа [3]. Ряд от ечественных и зарубежных научных работ был посвящён вопросам исследования иммунопато-генетических особенностей у пациентов с бор-релиозной инфекцией при различных клинических формах и стадиях заболевания [6, 7, 8, 9, 10]. Цитокиновый профиль в раннюю стадию заболевания определяет выраженность интоксикационно-воспалительного синдрома, клинические проявления болезни [10]. У пациентов с I стадией иксодового клещевого боррелиоза исследована роль некоторых Th1- и Th2-цитокинов (IFNy, IL-1a, IL-1ß, IL-4, IL-8, IL-12, IL-22, IL-23, TNFa), противовоспалительных интерлейкинов (IL-10) [6, 7, 8, 9, 10]. Однако, до настоящего времени не изучены особенности выработки сывороточных цитокинов, ответственных за аутоиммунные воспалительные процессы (IL-17A), и противовоспалительных интерлейкинов (IL-35) у больных с I стадией клещевого боррелиоза. Цель исследования. Провести сравнительный анализ уровня цитокинов сыворотки крови (IL-17A, IL-35) у пациентов с эритемной и безэ-ритемной формой I стадии боррелиозной инфекции. Задачи исследования. 1. Изучить особенности содержания IL-17A, IL-35 при эритемной и безэритемной форме I стадии иксодового клещевого боррелиоза при Р оссийский .^Аллергический ^Журнал 127 Бондаренко А. Л., Сапожникова В. В. госпитализации в инфекционный стационар. 2. Сравнить цитокиновый статус у пациентов с эритемной и безэритемной формой I стадии бор-релиозной инфекции. Материалы и методы исследования. В исследовании с 2011 по 2014 год участвовали 30 пациентов с эритемной формой и 30 пациентов с безэритемной формой I стадии боррелиозной инфекции. В каждой из групп исследования мужчины составляли 53,3% (16 человек), женщины - 46,7% (14 человек). Средний возраст пациентов с эритемной формой составил 48,4±12,2 лет, больных с безэритемной формой - 45,5±15,73 лет. Больные проходили стационарное лечение в Кировской инфекционной клинической больнице. Пациенты с эритемной формой были госпитализированы на 4,0±0,72 день болезни, также как и больные с безэритемной формой (на 4,1±0,66 день болезни). Исследование соответствовало законодательству Российской Федерации, было одобрено Локальным этическим комитетом Кировского ГМУ. От участников исследования было получено письменное информированное согласие. Клинический диагноз иксодового клещевого боррелиоза был поставлен с использованием классификации, разработанной Воробьёвой Н.Н. В исследовании не участвовали пациенты с соматической патологией опорно-двигательного аппарата, нервной системы, сердца, печени, почек. В исследование не были включены пациенты с онкологической патологией, острыми и хроническими инфекционными заболеваниями, беременностью, лактацией. Группа контроля состояла из 30 здоровых доноров, сопоставимых по половому и возрастному составу с группой исследуемых пациентов. Диагноз I стадии иксодового клещевого боррелиоза был поставлен на основании эпидемиологических, анамнестических, клинико-лабораторных показателей. Специфическое подтверждение диагноза включало серологические методы исследования с определением IgM и IgG в реакции иммуноферментного анализа в лаборатории Кировской инфекционной клинической больницы или определение антител к возбудителям боррелиозной инфекции методом иммунного блота (иммуночипа) в «Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии» (Москва). Концентрацию интерлейкинов сыворотки крови определяли у 30 пациентов с эритемной формой и 30 больных с безэритемной формой I стадии иксодового клещевого боррелиоза в первые сутки госпитализации, а также у 30 человек из контрольной группы. Образцы венозной крови отбирали в объеме 10 мл, центрифугировали 10 минут при 200 оборотах в минуту. Полученную сыворотку крови замораживали и хранили при температуре -200С. Определение ци-токинового профиля сыворотки крови проводили в лаборатории направленного регулирования межмикробных взаимодействий в экзо- и эндо-экологических системах ФГБОУ ВО «Кировский ГМУ» Минздрава России. В работе применялся автоматический иммуноферментный анализатор «Personal Lab», фирмы «Adaltis» (Италия) и диагностикумы <Æender MedSystems» (Австрия), «Uscscn Life Science Ins. Wuhan» (Китай). Содержание цитокинов определяли по построенной стандартной калибровочной кривой зависимости оптической плотности от концентрации для стандартного антигена в пикограммах на миллилитр (пг/мл). Статистическую обработку результатов осуществляли с использованием «StatSoft Statistica v 8.0» и «Microsoft Exel 2002». Минимальный объём выборок был оценен с помощью метода power analysis (stat soft), определена достаточность взятых объёмов выборок для мощности критерия (0,95). Распределение количественных данных (уровней интерлейкинов) было определено путём построения гистограмм и вычисления критерия Шапиро-Уилка. При оценке распределения количественных данных (уровней цитокинов) выявлено отличное от нормального распределение. При статистической обработке результатов вычислялись медиана (Me), нижний (Q 25,00) и верхний (Q 75,00) квартили. Для определения достоверности различий независимых выборок использовался непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Различия значений являлись достоверными при критическом уровне значимости более 95% (Р<0,05). Результаты. В ходе исследования определено содержание провоспалительного Ш-17А в сыворотке крови пациентов с эритемной формой I стадии иксодового клещевого боррелиоза при госпитализации, составившее 0,74 (0,22;3,19) пг/мл. В сыворотке крови здоровых доноров концентрация данного цитокина меньше в 3,9 раза - 0,19 (0,00; 0,64) пг/мл. При сравнении результатов профиля сывороточного IL-17A в группах пациентов с эритемной формой и здоровых доноров получены достоверные различия (р=0,002, р<0,01). Содержание IL-17A в сыворотке крови больных 128 Р оссийский .^Аллергический ^Журнал Сравнительная характеристика оппозиционных цитокинов (ил-17а, ил-35) сыворотки крови пациентов с эритемной и безэритемной формами _і стадии иксодового клещевого боррелиоза с безэритемной формой при госпитализации составило 0,54 (0,26; 0,63) пг/мл, что в 2,8 раза выше уровня здоровых доноров. Концентрация IL-17A сыворотки крови у пациентов с эритемной формой превышает в 1,4 раза показатели больных с безэритемной формой, полученные различия не достоверны (р=0,158, р>0,05). Известно, что IL-17A представляет собой гомодимер, цитокин с молекулярной массой 32 kDa [4]. IL-17A вырабатывается активированными ТЫ7-лимфоцита-ми-памяти. IL-17A стимулирует врождённый иммунитет и иммунную защиту организма. Данный цитокин мобилизует нейтрофилы через грануло-поэз, способствует их локальному выживанию. Продукция IL-17A Т-лимфоцитами регулируется активацией IL-23-рецептора. Цитокин IL-17A характеризуется выраженными воспалительными свойствами и способностью инициировать тяжёлые аутоиммунные патологии [4]. Ш-17А вызывает развитие воспалительных процессов в тканях головного мозга, суставных хрящей, костей, менисков, кожи [4]. В ходе нашей работы определено содержание противовоспалительного IL-35 в сыворотке крови пациентов с эритемной формой при госпитализации, составившее 22,99 (5,12; 50,62) пг/мл. Концентрации сывороточного IL-35 здоровых доноров ниже уровня пациентов с эритемной формой а - 17,16 (5,12; 28,67) пг/ мл (р=0,425, р>0,05). Уровень IL-35 в сыворотке больных с безэритемной формой при госпитализации составил 12,07 (2,03; 19,92) пг/мл, что достоверно ниже значений контрольной группы в 1,4 раза (р=0,006, р<0,01). Содержание IL-35 в сыворотке крови больных с эритемной формой в 1,9 раз выше, чем у больных с безэритемной формой (р=0,009, р<0,01). Известно, что IL-35 принадлежит семейству IL-12 и выделяется дендритными клетками, регуляторными Т-лимфоцитами супрессорами (Treg (Foxp3+)) [3, 5]. IL-35 состоит из двух субъединиц (Ebi3 и IL-12p35). IL-35 является регуляторным супрессорным фактором. Данный цитокин стимулирует наработку регуляторных Т-лимфоцитов супрессоров (Treg), приводящих к снижению дифференцировки Th17 и подавлению продукции IL-17A [3, 5]. Выводы. 1. У пациентов с эритемной формой иксодо-вого клещевого боррелиоза в периоде разгара выраженное повышение активности IL-17A сочетается с высокой выработкой IL-35, что свидетельствует об уравновешенности аутоимунных и противовоспалительных процессов. 2. У больных с безэритемной формой боррелиозной инфекции в разгар заболевания повышение сывороточных уровней IL-17A сопровождается недостаточной активностью ИЛ-35, что подтверждает преобладание аутоиммунных воспалительных процессов над иммуносупрессивными реакциями.