EXPRESSION OF MARKES OF APOPTOSIS IMMUNOCOMPETENT CELLS IN CHILDREN WITH TYPE 1 DIABETES

Abstract

Full Text

Сахарный диабет в XXI веке развивается по самым неутешительным прогнозам. Быстрый рост заболеваемости, серьёзные осложнения, высокая инвалидность и смертность определяют его острейшую медико-социальную значимость [3, 5]. По современным представлениям, сахарный диабет I типа (СД1) является результатом клеточно-опосредованной деструкции ß-клеток поджелудочной железы, приводящей к абсолютной инсулиновой недостаточности [5]. Ведущими звеньями в патогенезе аутоиммунных поражений при сахарном диабете являются ди-срегуляция иммунитета и программированной гибели клеток [1, 2, 4, 5, 6]. Контролируемый апоп-тоз рассматривается сегодня как главный меха- I низм поддержания оптимального баланса клеток в очаге тканевого воспаления, ограничивающий экспансию активированных клонов и препятствующий развитию аутоиммунных реакций. Основными в развитии аутоиммунных заболеваний нередко становятся нарушения процессов инициации и реализации апоптоза [5]. Цель исследования. Изучение активационных маркеров апоптоза CD95, CD95L, Bcl2 на лимфоцитах и нейтрофилах периферической крови при сахарном диабете 1 типа у детей. Материалы и методы. В работе представлено клинико-иммунологическое обследование 45 детей, страдающих сахарным диабетом, в том числе в возрасте 3-6 лет и 7-15 лет. В группу дошколь Р оссийский .^Аллергический ^Журнал 101 Барычева Л.Ю. , Хайт Г.Я., Эрдни-Горяева Н.В., Минасян М.М. ников вошло 20 детей (группа I). Дети школьного возраста (25) были разделены на две группы в зависимости от стажа заболевания. В группу II вошло 12 детей с длительностью заболевания до 3-х лет, в группу III - 13 детей со стажем заболевания более 3-х лет. Контрольную группу составили 30 здоровых детей в возрасте 3-6 (15) и 7-15 (15) лет. Исследование проведено на базе эндокринологического отделения ДГКБ им. Г.К. Филиппского г. Ставрополя и АНМО «Ставропольский краевой клинический консультативно-диагностический центр». Для оценки программируемой клеточной гибели выявляли количество лимфоцитов и нейтро-фильных гранулоцитов, экспрессирующих маркеры апоптоза - СD95, CD 95L и Bd2 (Invitrogen, США) методом проточной цитометрии (ФКУЗ «Ставропольский противочумный институт Ро-спотребнадзора»). Для статистического анализа данных использовали пакет программ «Primer of Biostat 4,0», Attestat 10.5.1.». Для оценки межгрупповых различий применяли дисперсионный анализ повторных измерений с вычислением критериев Ньюмена-Кейлса, Данна. Количественные значения характеризовались ненормальным распределением и были представлены в виде медианы и интерквантильного (25 и 75 процентили) размаха (Me (Q1-Q)). Достоверными считали различия при р<0,05. Результаты исследования. В работе было установлено уменьшение количества лимфоцитов, экспрессирующих Fas-рецепторы (CD95) у пациентов всех групп по сравнению со здоровыми детьми. В группе I показатели составили 17,7% (15,9-19,43), в группе II - 20,5 % (17,94-23,02), в группе III - 13,9 % (10,04-17,73). Минимальные показатели отмечены у детей 7-15 лет со стажем заболевания более 3-х лет. При этом уровень антиапоптотических маркеров (Bcl2) существенно возрастал с достоверным увеличением в группе III (p<0,05). У детей 3-6 лет показатели составили 70,2% (68,56-71,76), у детей 7-15 лет со стажем заболевания менее 3-х лет -70,3% (65,72-74,9), у школьников со стажем заболевания более 3-х лет - 79,5% (75,47-83,59). В культуре лимфоцитов детей, больных СД1, выявлено увеличение процентной доли лимфоцитов, экспрессирующих CD95L по сравнению с группой здоровых детей. Наиболее высокие по казатели определялись у детей 7-15 лет со стажем заболевания более 3-х лет - 15,6% (14,26-16,87), p<0,05. Полученные нами результаты могут быть косвенным признаком подавления программированной гибели аутореактивных лимфоцитов в ткани поджелудочной железы, что способствует пролонгации иммунного ответа [5]. Ранее было показано, что при сахарном диабете выявляется резистентность лимфоцитов к апоптозу, что, возможно, объясняет характер и продолжительность аутоиммунного ответа [4, 5]. При исследовании нейтрофильных грануло-цитов при СД1 у детей, установлена высокая готовность к апоптозу с увеличением экспрессии CD95, снижением - Bcl2. Максимальные показатели CD95 - 87,9% (84,24-91,63), p<0,05 и минимальные Bcl2 - 2,78% (2,36-3,19), p<0,05, выявлены в группе детей 7-15 лет с длительностью заболевания более 3-х лет. Доля нейтрофилов, экспрессирующих CD95, у школьников со стажем заболевания более 3-х лет составила 77,6% (71,1583,99), Bcl2 - 3,99% (2,9- 5,08). У детей 3-6 лет маркеры CD95 на нейтрофильных гранулоцитах экспрессировались в 75,1% (71,49-78,72), маркеры Bcl2 - в 3,68% (3,46-3,90). Выявлено увеличение процента полиморфноядерных лейкоцитов, имеющих на своей поверхности CD95L. Наиболее высокие показатели отмечены у детей 7-15 лет со стажем заболевания более 3-х лет - 12,1% (10,22-13,96). Заключение. Таким образом, при оценке апоптоза иммунокомпетентных клеток установлено снижение готовности к программированной клеточной гибели лимфоцитов и увеличение полиморфноядерных лейкоцитов. Наиболее выраженные изменения регистрируются в возрастной группе 7-15 лет со стажем заболевания более 3-х лет. У детей всех групп показано увеличение доли лейкоцитарных клеток, экспрессирующих на своей поверхности CD95L. Полученные нами результаты позволяют считать, что у больных СД1 отмечается повышенная предрасположенность нейтрофильных грануло-цитов к апоптозу, что может быть проявлением защитной реакции, направленной на устранение «излишка» активных нейтрофилов, формирование которого усиливает повреждение тканей [1, 6]. Снижение количества лимфоидных клеток, чувствительных к индукции апоптоза, является 102 Р оссийский .^Аллергический ^Журнал Экспрессия маркеров апоптоза иммунокомпетентными клетками у детей с сахарным диабетом 1 типа косвенным признаком подавления программированной клеточной гибели и нарушения элиминации активированных форм лимфоцитов [4, 5]. Увеличение экспрессии CD95L на лимфоцитах и нейтрофильных гранулоцитах при СД1 может способствовать усилению процессов запрограммированной клеточной гибели в островковых ß-клетках поджелудочной железы, инфильтрированных иммунокомпетентными клетками. Дис-регуляция апоптотической активности зависит от длительности заболевания и нарастает у детей со стажем заболевания более 3-х лет.