INFLUENCE OF GENETIC MARKERS OF ENDOTHELIAL DYSFUNCTION ON THE COURSE OF ASTHMA DURING PREGNANCY

Abstract

Full Text

Изучение вопроса взаимного отягощения бронхиальной астмы (БА) и беременности остаётся актуальным в связи с увеличением распространённости БА у женщин репродуктивного возраста, а, следовательно, повышением риска развития акушерских осложнений, увеличением случаев неблагоприятных перинатальных исходов, заболеваемости новорожденных и детей [1, 2, 3, 4]. Влияние беременности на течение БА до сих пор остаётся спорным вопросом и варьирует в широких пределах: улучшение отмечают 1869% женщин, ухудшение - 22-48,6%, отсутствие влияния беременности на течение БА - 27-43% случаев [2, 3, 5, 6]. За последние 5 лет в Амурской области выявлено утяжеление течения БА у беременных, что связанно с изменением социального портрета женщины, изменением климатических условий і (наводнение 2013 г.) [7, 8]. За последние десятки лет проведено множество исследований, касающихся влияния определённых генов на течение БА, в том числе и генов эндотелиальной синтазы (eNOS). В частности, широко обсуждается роль полиморфизма 4а/4Ь в 4 интроне в утяжелении течения БА [9]. Также хорошо изучена роль полиморфизма eNOS 894 G>T и 786 T>C при развитии сердечно-сосудистых заболеваний и влияние на сосудистый эндотелий. Но при этом отсутствуют работы по определению роли полиморфизма генов метаболизма фолатов на течение БА, хотя, по мнению ряда авторов [9, 10], у больных БА отмечается гипергомоцистеинемия, которая также ведет к повреждению сосудистого эндотелия. Цель исследования - определить влияние генетических полиморфизмов метаболизма фолатов и эндотелиальной синтазы оксида азота как 78 Р оссийский .^Аллергический ^Журнал Влияние генетических маркеров эндотелиальной дисфункции на течение бронхиальной астмы во время беременности на течение БА в период гестации, так и на течение беременности и состояние плода. Материалы и методы. Материалом для молекулярно-генетического исследования послужили образцы ДНК 52 беременных с БА и 30 беременных без бронхолегочной патологии (группа сравнения). Анализ генетических полиморфизмов осуществляли коммерческими наборами реагентов методом аллель-специфичной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в «режиме реального времени» со снятием кривых плавления продуктов амплификации. Анализ результатов ПЦР проводили в автоматическом режиме программного обеспечения, детектирующего амплификато-ра ДТпрайм (ООО «ДНК-Технология», Россия). Исследовали следующие полиморфные варианты генов: полиморфные варианты генов ключевых ферментов обмена фолата: MTHFR 677 С>^ MTHFR 1298 A>C, MTR 2756 A>G, MTRR 66 A>G и полиморфные варианты генов эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) 786 T>C, 894G>T. Наблюдаемое распределение полиморфных генов метаболизма фолатов, соответствовало равновесию Харди-Вайнберга во всех группах беременных, как с БА, так и в группе сравнения. Полученные результаты обрабатывались в программе STATISTICA 6.1, методами непараметрической статистики с применением двустороннего точного критерия Фишера, статистически достоверными считались различия при р <0,05. Результаты исследования и их обсуждение. При оценке частоты встречаемости генотипа 677СТ и 677ТТ в зависимости от наличия БА было установлено, что в группе беременных с БА полиморфный генотип встречался в 36 случаях (69,23%) из 52 (х2=9,95, р=0,0025, df=1), что статистически значимо выше, чем в группе сравнения - 10 (33,3%) из 30. При этом в случае наличия патологической гомозиготы в гене MTRRA66G повышается риск развития тяжёлой, атопической БА, отношение шансов (ОШ) составило 9,5 (ДИ 1,52;59,05). При наличии полиморфного генотипа 677ТТ обострения БА во время беременности отмечаются чаще, чем у беременных с нормальным генотипом 677СС (х2=4,27, р=0,03, df=1). Наличие мутантного аллеля 677Т имели 11 беременных, отметивших ухудшение течение БА во время беременности, при этом всего у 3 беременных с аллелем 677Т отмечено улучшение БА (^2=5,11, р=0,04 df=1). Относительный риск (ОР) ухудшение течения БА в периоде гестации составил 5,13 (ДИ 0,68;38,62). При этом ОР выше 2.5, т.е. риск очень высокий. ОШ - 6,47 (ДИ 0,54;56,13). Выявлено, что из всех генов на развитие эндо телиальной дисфункции большее значение оказывают гены MTHFR677 и MTRR66. При этом установлено, что у беременных с БА, имеющих полиморфизмы данных генов, достоверно чаще встречаются угроза прерывания беременности, гестоз, хроническая фетоплацентарная недостаточность (ХФПН), хроническая внутриутробная гипоксия (ХВУГ), задержка внутриутробного развития плода (ЗВПР) различной степени тяжести. ОШ развития осложнений беременности при наличии полиморфизма генов метаболизма фолатов MTHFR677 и MTRR66 составляет 6,29 (ДИ 3,44; 11,27) и достоверно выше, чем при отсутствии мутаций в данных генах. Также определено, что чем тяжелее протекает БА во время беременности, тем выше риск развития осложнений беременности, связанных с эндотелиальной дисфункцией. Наши результаты исследования согласуются с данными литературы по исследованию генов метаболизма фолатов и поражением эндотелия сосудов [11]. Наличие мутантного аллеля MTRR66 достоверно влияет на антропометрические показатели новорожденного, при нормальном генотипе MTRR66 АА масса составляет 3359±77,22 и рост 51,88±0,55, а при наличии в генотипе беременной с БА патологической гомозиготы MTRR66GG масса новорожденного равняется 2880± 124,8 (р=0,004) и рост 49,5±0,7 (р=0,03). У новорожденных от матерей с БА при наличии полиморфного генотипа MTHFR 677СТ и 677ТТ чаще выявляется перинатальное поражение ЦНС, чем у беременных с БА и нормальным генотипом по данному гену. ОР 1,66 (ДИ 1,09;2,53). ОШ перинатального поражения ЦНС 4,04 (ДИ 1,33;12,27). При оценке встречаемости полиморфного генотипа 894GT и 894ТТ и мутантного аллеля 894Т выявлено, что мутантный аллель Т достоверно чаще встречался у беременных с БА (p=0,04), а нормальный генотип 894 GG достоверно реже, чем в группе сравнения (р=0,01). Что же касается гена Т-786С, полиморфный генотип 786СТ достоверно чаще выявляется у беременных с БА (р=0,03), также, как и мутантный аллель 786С (р=0,0006), что соответствует данным литературы [12]. Доказано, что полиморфный генотип 894ТТ и мутантные аллели 894G и 786С достоверно ухудшают течение БА и являются маркером тяжелой БА (р1=0,0006; р2=0,03). Подтверждена роль участия eNOS в формировании дисфункции эндотелия. Выявлено влияние eNOS на развитие осложнений беременности, связанных с эндотелиальной дисфункцией: ге-стоза, угрозы прерывания беременности, анемии, наличием выкидышей в анамнезе у беременных с Р оссийский .^Аллергический ^Журнал 79 Лучникова Т.А., Приходько О.Б. БА. Для этого были определены корреляционные связи: eNOS894/гестоз (r=0,31, p=0,02); eNOS786/ выкидыш в анамнезе (r=0,29, p=0,034); eNOS894/ анемия (r=0,34, p=0,012); eNOS786/перинаталь-ное поражение ЦНС (r=0,391, p=0,003); eNOS894/ гомоцистеин (r=0,71, p=0,00000); eNOS894/ MTHFR1298 (r=0,34, p=0,01); eNOS894/MTR66 (r=0,43, p=0,001). Наличие сильной связи между генами eNOS и генами метаболизма фолатов подтверждает литературные данные о его влиянии на сосудистый эндотелий. Изученные полиморфизмы генов являются предикторами ухудшения течения БА и большей частоты осложнений беременности.