THE STUDY OF LYMPHOID AND PHAGOCYTIC CELLS OF DIFFERENT PHENOTYPES IN BURN DISEASE

Abstract

Full Text

Иммунопатологические нарушения являются важнейшим звеном патогенеза ожоговой болезни. У пациентов с тяжёлой термической травмой выраженные изменения иммунной системы, сопряженные с воспалительной реакцией и иммуносупрессией часто приводят к инфекционным осложнениям [1]. Для уточнения типа нарушений иммунной системы и поиска ещё неизвестных ключевых звеньев этих нарушений при развитии ожоговой болезни у тяжелообожжённых пациентов проведён анализ иммунофенотипических маркеров, которые ранее прицельно не изучались. На разных стадиях ожоговой болезни обследовано 39 пациентов - 19 женщин и 20 мужчин, средний возраст которых - 45 лет. Площадь ожогового поражения составила в среднем (М) 46,7% поверхности тела, из них глубоких ожогов - М=17,5% поверхности тела. Иммунный анализ фенотипа фагоцитарных и лимфоидных клеток у пациентов выполняли в цельной венозной крови (антикоагулянт К3ЭД-ТА) на проточном цитофлуориметре FACSCalibur Becton Discinson (США) c панелью меченых флу-орохромами (PE, FITC) с соответствующими изотипическими маркерами и прописью мето дики фирмы Becton Discinson. Группу сравнения составили 16 здоровых добровольцев. Изучали клетки с экспрессией HLA-DR+ антигенов ГКГС, естественных киллеров и их субпопуляций, Т-киллеров, Т-регуляторных лимфоцитов, клетки с экспрессией L-селектинов, рецепторов комплемента, эндотоксинов бактерий и ЛПС, аналогов рецептора ФНО, а также общие лимфоциты, гранулоциты и моноциты с соответствующими фенотипическими маркерами, различные иммунные индексы, представляющие соотношения ключевых клеток иммунной системы. Результаты показали, что в стадии острой ожоговой токсемии (3-10 день после ожоговой травмы) отмечено преимущественное достоверное возрастание содержания HLA-DR+ ЛФ (р<0,05 относительно группы сравнения) максимально до 44,1%. В более поздние сроки ожоговой болезни наблюдался дефицит HLA-DR+ЛФ до 3,6% (М=5,97%). В стадии ожоговой септикотоксемии, через 10-12 дней и более после травмы, у 18% больных возрастало содержание CD 3+/HLA-DR+ Лф на фоне глубокого дефицита HLA-DR+ МН, отражающих степень выраженности системной воспалительной реакции и инфекционно-воспалительного про 64 Р оссийский .^Аллергический ^Журнал Актуальность исследования лимфоидных и фагоцитарных клеток различных фенотипов при ожоговой болезни цесса, особенно при развитии сепсиса. Причем, у пациентов с критическими для жизни ожогами более 80% п.т. с сепсисом и летальным исходом данный показатель имел крайне низкий уровень, составляющий 10 - 25% (при норме > 50%). Независимо от стадии ожоговой болезни, отмечено достоверное возрастание CD54+Лф у 61,5% пациентов с наибольшим отклонением числа клеток до 56,8% (норма 13%). Похожие изменения, но у меньшего числа больных касались повышения CD54+^, причем в некоторых случаях до очень высоких цифр - 81%, тогда как изменение моноцитарных клеток с экспрессией CD54+Мн, напротив происходило в сторону дефицита, что может свидетельствовать о локальной миграции и аккумуляции лимфоидных и гранулоцитарных клеток в очаги ожогового поражения с формированием местного иммунитета. Обнаруженные достоверные изменения только в сторону повышения в среднем до 28,1% CD56+Мн - у 66,6 % обследованных больных, возможно, были связаны с развитием воспалительно-деструктивного процесса в организме. Известно, что естественные Т-киллеры CD3+CD56+Лф представляют субпопуляцию Т-клеток со свойствами Т-лимфо-цитов и естественных киллеров, обеспечивают цитотоксическую функцию (цитолиз инфицированных или повреждённых клеток организма). Они обладают цитотоксичностью против внутриклеточных микробных и вирусных патогенов и участвуют в регуляции аутоиммунных реакций (иммуносупрессия) [2]. Глубокий дефицит этих клеток мы обнаружили у 50% тяжёлых ожоговых больных на фоне инвазивной раневой инфекции, с преобладанием в тканевых биопта-тах полирезистентной микрофлоры и (или) ассоциации различных возбудителей (грибы, Гр+ и Гр- бактерий), наличия эндогенной интоксикации с микробным или аутоиммунным компонентом. Кроме того, на протяжении длительного времени сохранялся глубокий дефицит субпопуляций естественных регуляторных и эффектор-ных киллеров. Фактически, это очень важные субпопуляции, т. к. первая активно синтезирует цитокины, в том числе и интерфероны, и обладает слабым киллингом, т.е. может быть отнесена к регуляторным НК-клеткам, тогда как вторая имеет мощную цитотоксичность и слабую секрецию цитокинов. У пациентов с площадью ожогов > 50% поверхности тела, выявлено возрастание гранулоцитов с экспрессией активационных маркеров, в т.ч. с экспрессией аналогов рецепторов семейства ФНО, эндотоксина и ЛПС. Изменения оказывались значительно более выраженными у ожоговых больных с септическим осложнением, преимущественно в сочетании с токсическим повреждением нейтрофилов, тяжёлой эндогенной интоксикацией с микробным компонентом, на фоне выраженного лейкоцитоза со сдвигом формулы крови влево, появлением миелоцитов и юных форм нейтрофилов, возрастанием окси-дативного стресса фагоцитов, острофазовых реактантов (СРБ, ПКТ, пресепсин). Нейтрофилы у выше представленной когорты пациентов претерпевали и значительные функциональные изменения. Наблюдали нарушение подвижности клеток - хемотаксиса и спонтанной миграции (анализ выполняли in vitro [3]), причём в ряде случаев у пациентов с тяжёлым сепсисом регистрировался инвертированный характер хемотаксиса, когда нейтрофилы мигрировали от градиента хемоат-трактанта. У некоторых пациентов с ожогами и сепсисом, наблюдали повышенную продукцию нейтрофилами кислородных радикалов при фагоцитозе не опсонизированного зимозана. При этом в норме этот показатель был снижен почти в два раза по сравнению с фагоцитозом опсони-зированных частиц. Такое повышение опсони-нов в крови больных, по-видимому, можно связать с нарастанием бактериальной инвазии, что является прогностически важным признаком. К тому же негативным моментом у пациентов с сепсисом оказывалось также наблюдаемое нами частое и значительное снижение аффинности рецептора СD16 на мембране нейтрофилов (одной из его функций является фагоцитоз опсони-зированных патогенов [4]), что также снижает антимикробный потенциал фагоцитов. Как уже отмечалось, иммунные индексы представляют собой соотношения клеток с экспрессией маркеров активации (CD25, HLA-DR), адгезии (CD11b) и апоптоза (CD95) и применяются нами в диагностике нарушений клеточно-молекулярных функций Т-системы иммунитета. Изменения данных соотношений могут свидетельствовать о нарушении активации иммунокомпетентных клеток крови за счёт развития дефицита функциональной активности клеток с истощением их резерва, адгезивной и активационной способности Т-лимфоцитов на фоне повышенной готовности Р оссийский .^Аллергический ^Журнал 65 Земсков В.М., Козлова М.Н., Барсуков А.А., Шишкина Н.С., Земсков А.М., Алексеев А.А., Демидова В.С. к апоптозу и позволяет косвенно судить о развитии иммунодефицитного состояния, возможной хронизации и персистенции инфекции, а также отражать наличие острого воспаления [5]. Высокоинформативным оказывается индекс CD4+\ CD8+ (соотношение Т-хелперов и цитотоксиче-ских Т-лимфоцитов). На разных этапах нормально протекающего воспаления количество этих клеток в крови мало меняется и индекс остается > 1,0. Однако при тяжёлом течении воспаления этот индекс падает < 1,0, возможно за счёт миграции в воспалительные очаги Т-лимфоцитов, особенно при развитии воспалительных септических процессов на фоне инвазивной инфекции. Таким образом, применение в обследовании у ожоговых больных мало использованных ранее фенотипических маркеров Т-лимфоцитов и других клеток, ряда иммунных фенотипических индексов, отражающих соотношение различных субпопуляций Т-лимфоцитов с экспрессией соответствующих маркеров, способствует получению крайне важной и принципиально новой информации о состоянии иммунной системы, воспалении, бактериальных осложнениях пациентов. Данный алгоритм обследования широко используется нами для более точной диагностики и прогноза инфекционных осложнений не только у всех больных с ожогами, но и у других наиболее тяжёлых пациентов Института хирургии им. А. В. Вишневского, т.к. являются важным подспорьем для оценки иммунного статуса и назначения им-мунотропной и других видов терапии.