INTERRELATION OF THE DEFENZINOV LEVELS AND METABOLIC ACTIVITY OF NEUTROPHILS AT PATIENTS WITHHYPERSENSITIVITY TO STOMATOLOGIC MATERIALS

Abstract

Full Text

Раскрытие механизмов негативного влияния протезов и протезных материалов на состояние органов и тканей рта и организм человека обуславливает необходимость изучения роли иммунной системы в возникновении непереносимости стоматологических материалов (НСМ). Уровни дефензинов в ротовой жидкости (РЖ) могут быть маркером для оценки риска и ранней диагностики патологических состояний, связанных с воздействием различных конструкций зубных протезов на слизистую оболочку полости рта (СОПР) [1]. Выделяют два основных подсемейства, а именно - a-дефензины и ß-дефензины [2]. a-Дефензи-ны (HNP1, HNP2, HNP3, HNP4) продуцируются нейтрофилами [3], в то время как ß-дефензины (hBD1, hBD2, hBD3, hBD4) продуцируются эпителиальными клетками слизистой оболочки [4, 5]. Именно поэтому углубленное изучение влияния неблагоприятного действия стоматологических материалов на уровни a- и ß-дефензинов в РЖ вызывает научный интерес, а также взаимосвязь уровня нейтрофильного a-1-дефензина в РЖ и метаболической активности нейтрофилов. Материалы и методы исследования 1. Клиническая характеристика и принципы деления на группы пациентов с НСМ. Проведено обследование 20 пациентов в возрасте от 44 до 68 лет, из них 2 мужчин и 18 женщин, направленные в клинику с жалобами на НCМ. У всех пациентов выявлена причинно-следственная связь между возникновением симптомов непереносимости зубопротезного материала и фактом контакта с ним, а также положительные результаты постановки аппликационных проб (АП). Во вторую группу (контрольную) вошли 19 пациентов (2 мужчины и 17 женщин) без жалоб на НСМ. Все пациенты, включенные в исследование, дали и собственноручно заполнили добровольное информированное согласие на участие в работе. Сформированные группы сопоставимы по возрастной и половой категориям, количеству зубопротезных единиц, виду ортопедических конструкций и срокам пользования ими. Аппликационное накожное тестирование с растворами солей металлов. Всем участникам исследования в двух группах осуществлялась постановка аппликационного накожного тестирования с растворами солей металлов в различных концентрациях на вазелиновой основе с использованием в качестве апплика Р оссийский .^Аллергический ^Журнал 61 Карпук И.Ю., Новиков Д.К. тора лейкопластыря «Унипласт Фиксирующий» 5Х500 см. Результаты постановки АП оценивались через 3, 24 и 48 часов. Использованы следующие соли NiCl2 (3%), CrCl3 (3%), CoCl2 (1%). В качестве негативного контроля использовался чистый медицинский вазелин. Интерпретация результатов кожного тестирования проводилась согласно общепринятой методике [6]. 2. Забор и подготовка РЖ для определения уровней a-1- и ß-1-дефензинов до и после снятия ортопедических конструкций у пациентов опытной и контрольной групп. Методика забора и подготовки к исследованию ротовой жидкости. Проба №1 забиралась в момент обращения и спустя 1 месяц после снятия причинных конструкций (проба №2). Ротовую жидкость (РЖ) получали с 9 до 11 часов дня путем сплевывания в стерильные пробирки без стимуляции утром, натощак, без предварительной чистки зубов. РЖ хранили в жидком азоте. Образцы РЖ (1-1,5 мл) центрифугировали при 7000 об/мин в течение 20 минут. Далее пробы фильтровали через фильтры шприцевые Corning® с мембраной из полиэфирсульфона PES, 0,22 мкм, 28 мм, стерильные, в индивидуальной упаковке. Лабораторные методы обследования. Определение уровней Human DEFa1 (Defensin Alpha 1, Neutrophil) и Human DEFB1 (Defensin Betа1)осуществляли с использованием ИФА тест-систем (номера по каталогу E-EL-H0833 и E-EL-H0995 соответственно). Постановка НСТ-теста осуществлялась в спонтанном (без антигена) и в индуцированном (с добавлением в пробу специфического антигена) вариантах. В качестве индуктора использована живая взвесь стафилококков [6]. Статистическая обработка результатов исследования проводилась при помощи STATISTICA 10.0. Цель исследования: определить взаимосвязь уровней дефензинов и метаболической активности нейтрофилов у пациентов гиперчувствительностью к стоматологическим материалам. Результаты исследований Определение и клиническое значение a-1- и ß-1-дефензинов в РЖ пациентов с жалобами на НСМ до и через 1 месяц после снятия причинных ортопедических конструкций. У пациентов с НCМ аллергической этиологии (n=20) показатели среднего уровня a-1-дефензи-на в РЖ до снятия причинных ортопедических конструкций составил 1,56 [1, 19; 1, 95] нг/мл, а спустя 1 месяц после снятия - 0,61 [0, 44; 0, 68] нг/ мл. Уровень ß-1-дефензинов у пациентов данной группы менялся статистически значимо: до снятия 2,9 [2, 3; 3, 4] нг/мл после снятия ортопедических конструкций, а после снятия - 3,8 [3, 1; 4, 9] нг/мл. Следовательно, устранение индуктора аллергии снижало уровень a-1-дефензина в РЖ, а уровень ß-1-дефензинов - повышало. По-нашему мнению, снижение уровня a-1-дефензина в РЖ может быть связано с гиперчувствительностью нейтрофилов к компонентам дентальных сплавов, так как основным источником a-1-дефензи-на являются азурофильные гранулы нейтрофило. Повышение уровня ß-1-дефензина после снятия ортопедических конструкций может быть связана с улучшением регенерации эпителия, так как основным источником ß-дефензинов является эпителий СОПР. Уровень a-1-дефензина в РЖ у пациентов контрольной группы (n=19) до снятия ортопедических конструкций составил 0,57 [0, 43; 0, 69] нг/мл, а спустя 1 месяц после снятия - 0,58 [0, 46; 0, 73] нг/мл. Исходный уровень a-1-дефензина в этой группе (0,57 нг/мл) был существенно ниже (P Mann-Whitney ^0,05) чЄм в первой группе (1,56 нг/ мл), что указывает на влияние ортопедических конструкций на выброс a-1-дефензина нейтро-филами у пациентов с гиперчувствительностью. При исследовании уровня ß-1-дефензина в РЖ пациентов контрольной группы были получены следующие результаты: концентрация до снятия составила 3,1 [2, 9; 3, 6] нг/мл, и после - 3,2 [3, 2; 3, 8] нг/мл не имели статистически достоверных различий (PWilcoxon>0,05), однако отмечалась тенденция к росту уровня ß-1-дефензина после снятия ортопедических конструкций. В ходе анализа полученных данных было установлено, что концентрация бета-1-дефензина у пациентов опытной группы была достоверно ниже, чем в контрольной группе (р=0,036), что также может указывать на угнетение мукозального иммунитета у пациентов с гиперчувствительностью к дентальным сплавам. Поэтому можно судить о том, что уровень a-1-дефензина в РЖ позволяет объективно оценивать влияние зубопротезных материалов на гиперреактивность нейтрофильных лейкоцитов, 62 Р оссийский .^Аллергический ^Журнал Взаимосвязь уровней дефензинов и метаболической активности нейтрофилов у пациентов c гиперчувствительностью к стоматологическим материалам а уровень ß -1-дефензина - на местную реактивность эпителия СОПР. У больных первой группы с развитием НCМ, с более выраженной симптоматикой и выявленной сенсибилизацией к ионам металлов по АП уровень a- и ß -1-дефензинов в РЖ был выше, чем у пациентов контрольной группы. По изменению уровня a-1-дефензина в РЖ до и после снятия причинных конструкций можно сделать выводы об участии нейтрофилов в патогенезе гиперчувствительности к дентальным сплавам. У пациентов с НСМ и гиперчувствительностью отмечается снижение концентрации a-1-дефензина в РЖ через месяц после снятия протезов по сравнению с исходным уровнем. Установлена гиперактивность клеток врожденного иммунитета, а именно нейтро-фильных гранулоцитов по результатам спонтанного (15,3±4,5%) и индуцированного (55,2±3,8%) НСТ-теста у пациентов с НСМ и выявленной гиперчувствительностью к компонентам дентальных сплавов, что достоверно (р<0,05) различалось с аналогичными показателями пациентов контрольной группы: НСТ-тест спонтанный (12,4±1,8%) и индуцированный (41,4±5,3%). Через месяц после снятия ортопедических конструкций у пациентов с НСМ и выявленной гиперчувствительностью к компонентам дентальных сплавов результаты спонтанного (11,3±2,1%) и индуцированного (41,4±4,2%) НСТ-теста достоверно (р<0,05) снизились. Показатели повышенной метаболической активности нейтрофилов у пациентов с жалобами на НСМ и выявленной гиперчувствительностью к дентальным сплавам и их компонентам, определяемой в НСТ-тесте, коррелировали с уровнем a-1-дефензина (R=0,76; р<0,05). Выводы 1. У пациентов с НСМ аллергической этиологии (n=20), доказанной аппликационными пробами с солями металлов, показатели среднего уровня a-1-дефензина в РЖ до снятия причинных ортопедических конструкций составили 1,56 [1, 19; 1, 95] нг/мл, а спустя 1 месяц после снятия - 0,61 [0, 44; 0, 68] нг/мл (PWilcoxon<0,05). Уровень a-1-дефензина в РЖ у пациентов без непереносимости стоматологических материалов (n=19) до снятия ортопедических конструкций составил 0,57 [0, 43; 0, 69] нг/мл, а спустя 1 месяц после снятия - 0,58 [0, 46; 0, 73] нг/мл и не имел достоверных отличий (PWilcoxon>0,05). 2. Взаимосвязь уровня a-1- дефензина и метаболической активности нейтрофилов (R=0,76; р<0,05) отражают развитие иммунного ответа организма у пациентов с гиперчувствительностью к компонентам дентальных сплавов. Повышенная концентрация нейтрофильного a-1-дефензина в РЖ и повышение метаболической активности нейтрофилов до снятия причинных ортопедических конструкций, и снижение этих показателей после снятия указывает на возможность участия нейтрофилов в развитии гиперчувствительности организма к компонентам дентальных сплавов. 3. Уровень ß-1-дефензина у пациентов с жалобами на НСМ аллергической этиологии (n=20) составил до снятия протезов - 2,9 [2, 3; 3, 4] нг/ мл и возрос после снятия ортопедических конструкций до 3,8 [3, 1; 4, 9] нг/мл (PWilcoxon>0,05). При исследовании уровней ß-1-дефензина в РЖ пациентов без НСМ (n=19) его концентрация до снятия протезов составила 3,1 [2, 9; 3, 6] нг/ мл, а после - 3,2 [3, 2; 3, 8] нг/мл и между ними не имелось статистически достоверных различий (PWilcoxon>0,05). В ходе анализа полученных данных было установлено, что концентрация бе-та-1-дефензина у пациентов с НСМ была достоверно ниже, чем в контрольной группе (р=0,036), что может указывать на угнетение его продукции эпителием у пациентов с гиперчувствительностью к дентальным сплавам и снижение мукозального иммунитета.