EFFECTS OF HUMIC ACIDS ON AUTOIMMUNE INFLAMMATION IN ADJUVANT-INDUCED ARTHRITIS RAT MODEL

Abstract

Full Text

В многочисленных исследованиях было показано, что пелоидотерапия оказывает определённый терапевтический эффект в клинических условиях при заболеваниях, в основе которых лежат аутоиммунные процессы [1-3]. Наряду с этим, гуминовые кислоты не обладают выраженным ци-тотоксическим эффектом [4]. При этом механизмы влияния гуминовых кислот, основного терапевтического компонента медицинских грязей, на развитие аутоиммунных реакций остаются невыясненными. Целью нашей работы явилось изучение влияния гуминовых кислот на хронический аутоиммунный процесс в экспериментальной модели адъювантного полиартрита на крысах, в развитии которого преобладает элемент гиперчувствительности замедленного типа. Материалы и методы. Гуминовые кислоты были получены путем фракционирования лечебных грязей (пелоидов) озера Молочка санатория ФГБУЗ МРЦ «Сергиевские минеральные воды» ФМБА России, Самарская область [5]. Хроническое иммунное воспаление моделировали у крыс линии Wistar субплантарным введением в правую заднюю лапу 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда (взвесь БЦЖ 2,5 мг/мл в вазелиновом масле), который позволяет активировать макрофаги и костимулировать Т-клетки. Введение гумино-вых кислот начинали с 14-го дня после инъекции адъюванта. Гуминовые кислоты в виде 0,1% водных растворов (рН=7,4) вводили ежедневно. Воспали тельная реакция оценивалась на 3, 7, 12 сутки после начала лечения. Оценивалось изменение содержания общего пула лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов в крови. Была определена концентрация гемоглобина, скорость оседания эритроцитов, количество нейтрофильных гранулоцитов, в том числе палочкоядерных и сегментоядерных, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов и базофилов. Для более детального изучения влияния препарата на ма-крофагально-фагоцитарную и иммунную системы определяли уровень C-реактивного белка и циркулирующих иммунных комплексов, содержание фи-бронектина, а также провоспалительных цитокинов (интерлейкин 1-ß и фактор некроза опухоли-a) в сыворотке крови. При развитии экспериментального полиартрита определяли содержание иммуно-регуляторных субпопуляций лимфоцитов (CD4+ и CD8+ лимфоцитов) с расчётом иммунорегулятор-ного индекса. Результаты. Анализ полученных данных показал, что в процессе воспроизведения экспериментального полиартрита у крыс выявлялись существенные сдвиги изучаемых показателей. Через 17 суток после введения адъюванта Фрейнда имело место более чем трёхкратное увеличение содержания в крови лейкоцитов, уровень которых достигал значений 25,2+2,0 клеток*109/л. СОЭ, относительное количество палочкоядерных нейтрофильных гранулоцитов были также существенно увеличены. Средние значения показателей составляли 7,2±0,2 44 Р оссийский .^Аллергический ^Журнал Изучение влияния гуминовых кислот на аутоиммунное воспаление на модели адъювантного полиартрита мм/час и 9,5±0,3%, что, соответственно, в 2,9 и 3,0 раза больше нормативных значений. Отмечались сдвиги и в содержании провоспалительных цито-кинов: уровни интерлейкина 1-ß и фактора некроза опухоли в сыворотке крови повышались, соответственно в 2,4 и 1,7 раза по сравнению с нормативными значениями, составляя 55,8±0,9 и 60,6±1,5 пкг/ мл. Был также повышен уровень фибронектина в сыворотке крови: его концентрация достигала значений 317,5±12,3 мкг/мл. Возрастало содержание циркулирующих в крови иммунных комплексов до 93,5±0,05%. Выявленные значительные изменения данных показателей активности воспалительного процесса сопровождались перераспределением в крови баланса иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов: у животных содержание CD4+ клеток в лимфограмме возрастало до 43,5±4,4% (при норме 31,1±2,5%), а относительное количество CD8+ лимфоцитов падало до 11,2±0,5% (при норме 18,8±1,0%). Вследствие этого возрастал иммуннорегуляторный индекс, средние значения которого достигали 4,1±0,2. Всё это свидетельствовало об интенсивном развитии воспалительных процессов с участием аутоиммунного компонента в организме экспериментальных животных. Анализ полученных данных при введении гу-миновых кислот показал, что инъекции животным с развившимся адъювантным полиартритом снижали выраженность воспалительного процесса с аутоиммунным компонентом, при этом терапевтический эффект нарастал с увеличением количества инъекций. После 3 инъекций препарата (17 сутки эксперимента) лейкоцитоз в крови был менее выраженным, чем у интактных животных в тот же срок наблюдения - количество циркулирующих в крови лейкоцитов составляло 19,5±0,8 клеток*106/мл и превышало нормальные значения в 2,4 раза. Концентрации интерлейкина 1-ß и фактора некроза опухолей были не столь высокими, как в группе сравнения, но превышали нормативные значения в 1,6 и в 1,5 раза, составляя 35,4±0,01 и 51,4±1,3пкг/мл, соответственно. Уровень циркулирующих иммунных комплексов не был повышенным по сравнению с данным показателем у здоровых животных. После семи инъекций гуминовых кислот противовоспалительное действие препарата было выражено более ярко. Так, уровень лейкоцитов в крови животных снижался до нормативных значений, средние значения СОЭ превосходили норматив ные лишь в 1,3 раза, количество полиморфноядерных нейтрофильных гранулоцитов снижалось до 4,2±0,1%. Содержание циркулирующих иммунных комплексов было в пределах нормальных значений, при этом наблюдался незначительный дисбаланс иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоци-тов. Максимальный противовоспалительный эффект гуминовых кислот был выявлен к 26 суткам эксперимента (12 день введения). Препарат практически полностью восстанавливал гематологические и иммунологические показатели до нормативных значений. Выводы. Таким образом, изучение влияния гу-миновых кислот на активность воспалительного процесса и иммунологический статус животных с экспериментальным полиартритом, вызванным введением адьюванта Фрейнда, показало выраженный противовоспалительный и иммунокорригирующий эффекты гуминовых кислот, что проявлялось в нормализации лейкограммы, функционально-метаболических свойств моноцитарно-макрофагаль-ной системы, нивелировании дисбаланса иммуно-регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов. Это, по-видимому, является отражением уменьшения активности аутоиммунных реакций при экспериментальном поражении суставов у животных.