<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE root>
<article xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" xmlns:ali="http://www.niso.org/schemas/ali/1.0/" article-type="research-article" dtd-version="1.2" xml:lang="en"><front><journal-meta><journal-id journal-id-type="publisher-id">Russian Journal of Allergy</journal-id><journal-title-group><journal-title xml:lang="en">Russian Journal of Allergy</journal-title><trans-title-group xml:lang="ru"><trans-title>Российский Аллергологический Журнал</trans-title></trans-title-group></journal-title-group><issn publication-format="print">1810-8830</issn><issn publication-format="electronic">2686-682X</issn><publisher><publisher-name xml:lang="en">Publishing House ABV Press</publisher-name></publisher></journal-meta><article-meta><article-id pub-id-type="publisher-id">690</article-id><article-id pub-id-type="doi">10.36691/RJA690</article-id><article-categories><subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="en"><subject>Articles</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="ru"><subject>Статьи</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="article-type"><subject>Research Article</subject></subj-group></article-categories><title-group><article-title xml:lang="en">PRODUCTION AND CHARACTERIZATION OF RECOMBINANT PROTEINS CONTAINING BET V 2 ANTIGENIC EPITOPES OF BETULA PENDULA</article-title><trans-title-group xml:lang="ru"><trans-title>Получение и характеристика рекомбинантного белка, содержащегоантигенные эпитопы аллергена Bet v 2 березы повислой</trans-title></trans-title-group></title-group><contrib-group><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Chernysheva</surname><given-names>A V</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Чернышева</surname><given-names>А Б</given-names></name></name-alternatives><xref ref-type="aff" rid="aff1"/></contrib><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Tyutyaeva</surname><given-names>V V</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Тютяева</surname><given-names>Б Б</given-names></name></name-alternatives><xref ref-type="aff" rid="aff2"/></contrib><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Pivovarova</surname><given-names>A V</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Пивоварова</surname><given-names>А Б</given-names></name></name-alternatives><xref ref-type="aff" rid="aff2"/></contrib><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Andreev</surname><given-names>I V</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Андреев</surname><given-names>И В</given-names></name></name-alternatives><xref ref-type="aff" rid="aff1"/></contrib><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Sankov</surname><given-names>M N</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Санков</surname><given-names>М Н</given-names></name></name-alternatives><xref ref-type="aff" rid="aff1"/></contrib><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Kuzmenko</surname><given-names>Y V</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Кузьменко</surname><given-names>Ю В</given-names></name></name-alternatives><xref ref-type="aff" rid="aff2"/></contrib><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Starodubova</surname><given-names>E S</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Стародубова</surname><given-names>Е С</given-names></name></name-alternatives><xref ref-type="aff" rid="aff2"/></contrib><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Martynov</surname><given-names>A I</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Мартынов</surname><given-names>Александр Игоревич</given-names></name></name-alternatives><email>medimm@mail.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff1"/></contrib><contrib contrib-type="author"><name-alternatives><name xml:lang="en"><surname>Karpov</surname><given-names>V L</given-names></name><name xml:lang="ru"><surname>Карпов</surname><given-names>Б Л</given-names></name></name-alternatives><xref ref-type="aff" rid="aff2"/></contrib></contrib-group><aff-alternatives id="aff1"><aff><institution xml:lang="en">Institute of Immunology</institution></aff><aff><institution xml:lang="ru">ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России</institution></aff></aff-alternatives><aff-alternatives id="aff2"><aff><institution xml:lang="en">Federal State Budget Institution of Science Engelhardt Institute of Molecular Biology, Russian Academy of Sciences</institution></aff><aff><institution xml:lang="ru">ФГБУН Институт молекулярной биологии им. Б.А. Энгельгардта РАН</institution></aff></aff-alternatives><pub-date date-type="pub" iso-8601-date="2012-12-15" publication-format="electronic"><day>15</day><month>12</month><year>2012</year></pub-date><volume>9</volume><issue>6</issue><issue-title xml:lang="en">NO6 (2012)</issue-title><issue-title xml:lang="ru">№6 (2012)</issue-title><fpage>28</fpage><lpage>31</lpage><history><date date-type="received" iso-8601-date="2020-03-10"><day>10</day><month>03</month><year>2020</year></date></history><permissions><copyright-statement xml:lang="en">Copyright ©; 2012, Pharmarus Print Media</copyright-statement><copyright-statement xml:lang="ru">Copyright ©; 2012, Фармарус Принт Медиа</copyright-statement><copyright-year>2012</copyright-year><copyright-holder xml:lang="en">Pharmarus Print Media</copyright-holder><copyright-holder xml:lang="ru">Фармарус Принт Медиа</copyright-holder><ali:free_to_read xmlns:ali="http://www.niso.org/schemas/ali/1.0/" start_date="2014-12-15"/></permissions><self-uri xlink:href="https://rusalljournal.ru/raj/article/view/690">https://rusalljournal.ru/raj/article/view/690</self-uri><abstract xml:lang="en"><p>Aim of investigation. Production of immunologically active recombinant protein of Bet v 2 allergen ofbirch pollen. Materials and methods. mRNA was isolated from a sample ofbirch pollen. cDNA library was derived using SMART technology. Gene Bet v 2 was amplified by means of PCR with primers from the cDNA. The resulting PCR fragment of the gene was cloned into the vector pET29b(+). The recombinant protein Bet v 2 was expressed in cells E. coli, transformed with a plasmid. The recombinant protein was purified using NiNTA agarose. Immunological activity of the recombinant protein Bet v 2 was measured by ELISA and immunoblot methods. Results. The production system of the recombinant allergen Bet v 2 preparation suitable for immunological tests was developed during the research project. In the first phase allergen Bet v 2 gene was cloned from birch pollen collected in Russia. The gene was inserted into the vector pET29(+) for expression in bacterial cells. The expression cell strain E. coli was obtained with this plasmid. The synthesis of the recombinant protein that accumulates in inclusion bodies was activated in bacterial cells. The procedure of recombinant protein Bet v 2 isolation from inclusion bodies was developed by one round of chromatography purification. The recombinant protein isolation was carried out by chromatography on Niagarose. The highly purified preparation of the recombinant allergen was obtained as a result. The recognition of the recombinant protein Bet v 2 by sera varied in ELISA, indicating a different degree of patients sensitization to this allergen. In the immunoblot test the preparation was active only in 15% of cases. Apparently, reactive epitopes of the allergen are mainly conformational ones and are active in ELISA test, whereas linear epitopes, that are active in immunoblot, are in the minority. Conclusion.The system for production of recombinant allergen Bet v 2 preparation suitable for immunological tests has been developed.</p></abstract><trans-abstract xml:lang="ru"><p>Цель исследования. Получение иммунологически активного рекомбинантного белка-аллергена Bet v 2 пыльцы березы. Материалы и методы. Из образца пыльцы березы была выделена мрНК. С помощью методики SMART была получена библиотека кДНК. С помощью ПЦр с праймерами с кДНК амплифицировали ген Bet v 2. Полученный ПЦр-фрагмент гена был клонирован в вектор pET-29b(+). рекомбинантный белок Bet v 2 был экспрессирован в клетках E. coli, трансформированных плазмидой. рекомбинантный белок очищали с использованием Ni-NTA агарозы. Иммунологическую активность рекомбинантного белка Bet v 2 определяли с помощью ИФА и иммуноблота. Результаты. Б ходе работы была создана система по наработке препарата рекомбинантного аллергена Bet v 2, пригодного для иммунологических тестов. На первом этапе из пыльцы березы, собранной на территории РФ, был клонирован ген аллергена Bet v 2. Ген был включен в вектор pET29(+) для экспрессии в бактериальных клетках. С данной плазмидой был получен экспрессионный штамм клеток E. coli. Б бактериальных клетках активировался синтез рекомбинантного белка, который накапливался в тельцах включения. Была разработана методика выделения рекомбинантного белка Bet v 2 из телец включения с помощью одного раунда хроматографической очистки. Быделение рекомбинантного белка проводили с помощью хроматографии на Ni-агарозе. Б результате был получен высокоочищенный препарат рекомбинантного аллергена. Б ИФА узнавание рекомбинантного белка Bet v 2 сыворотками различалось, что говорит о разной степени сенсибилизации пациентов к данному аллергену. Б иммуноблот-тесте препарат был активен только в 15% случаев. По всей видимости, активные эпитопы данного аллергена в основном конформационные и активны в тесте ИФА, тогда как линейные эпитопы, активные в иммуноблоте, составляют малую часть. Заключение. Создана система для наработки препарата рекомбинантного аллергена Bet v 2, пригодного для иммунологических тестов.</p></trans-abstract><kwd-group xml:lang="en"><kwd>Bet v 2</kwd><kwd>pollen allergen</kwd><kwd>Betula pendula</kwd><kwd>Bet v 2</kwd><kwd>profilin</kwd><kwd>purification methods</kwd><kwd>isolation procedure</kwd></kwd-group><kwd-group xml:lang="ru"><kwd>аллерген пыльцы</kwd><kwd>береза повислая</kwd><kwd>профилин</kwd><kwd>методика очистки</kwd></kwd-group></article-meta></front><body></body><back><ref-list><ref id="B1"><label>1.</label><mixed-citation>Казиев А.Х., Райкис Б.Н., Пожарская В.О. Перспективы разработки рекомбинантных аллергенов. Аллергология. 2002, т. 2, с. 17-20.</mixed-citation></ref><ref id="B2"><label>2.</label><mixed-citation>Erler A., Hawranek Т., Krückemeier L. et al. Proteomic profiling ofbirch (Betula verrucosa) pollen extracts from different origins. Proteomics. 2011, v. 11 (8), p. 1486-1498.</mixed-citation></ref><ref id="B3"><label>3.</label><mixed-citation>Cromwell O., Häfner D., Nandy A. Recombinant allergens for specific immunotherapy. J. Allergy Clin. Immunol. 2011, v. 127 (4), p. 865-872.</mixed-citation></ref><ref id="B4"><label>4.</label><mixed-citation>Schmidt W.M., Mueller M.W. CapSelect: a highly sensitive method for 5’ CAP-dependent enrichment of full length cDNA in PCR-mediated analyses of mRNAs. Nucleic Acid Res. 1999, v. 27, p. 31.</mixed-citation></ref><ref id="B5"><label>5.</label><mixed-citation>Zhu Y.Y., Machleder E.M., Chenchik A. et al. Reverse transcriptase template switching: a SMART approach for full-length cDNA library construction. Biotechniques. 2001, v. 30, p. 892-897.</mixed-citation></ref></ref-list></back></article>
