Background. For wide introduction of the component allergy diagnostics in laboratory practice it is necessary to create methods of production, purification and verification of synthetic allergens. Major birch pollen protein Bet v 1, a representative of the superfamily PR-10, is interesting due to the high incidence of sensitization and the manifestation of cross-reactive properties. Methods. To receive a synthetic protein DNA cloning techniques were used, followed by expression in E. coli. Purification was made by metal-affinity chromatography. Evaluation of immunochemical properties was held in several tests including ELISA analysis and line-blot. Results. We have obtained high-yield bacterial strain E. coli, containing expression vector for protein Bet v 1 production. Physico-chemical and immunological properties were estimated in various test systems with the reference panel of serum. Conclusion. It was shown that the resulting synthetic analogue of protein Bet v 1 can be used to measure the presence of specific immunoglobulin E in serum samples. This allergenic component may be used for estimation of each component of the sensitization profile.
Цель работы. Для внедрения покомпонентной аллергодиагностики в лабораторную практику необходимо создать протоколы получения, очистки и верификации свойств синтетических аллергенов. Мажорный белок пыльцы березы Bet v 1, являющийся представителем суперсемейства PR-10, представляет значительный интерес благодаря высокой частоте случаев сенсибилизации и проявлению кросс-реактивных свойств. Материалы и методы. Для получения синтетического белка были применены методы клонирования ДНК с последующей экспрессией в культуре клеток E. coli. Очистка выполнена методом металл-аффинной хроматографии. Оценка иммунохимических свойств проведена в аллергосорбентном тесте, ИФА-анализе и лайн-блоте. Результаты. В ходе работы нами получен высокопродуктивный бактериальный штамм E. coli, содержащий экспрессионную конструкцию мажорного аллергена пыльцы березы — белок Bet v 1. Произведена оценка его физико-химических и иммунологических свойств в различных тест-системах с использованием референсных препаратов и панели сывороток. Заключение. Показано, что полученный синтетический аналог белка Bet v 1 может быть использован для тестирования наличия аллерген-специфических иммуноглобулинов класса Е в образцах сыворотки крови. Данный аллергенный компонент может быть применен для покомпонентной оценки профиля сенсибилизации пациента.