BACKGROUND: Standardization of medical forms of allergens is the process of establishing and applying a unified system of quality indicators and control methods. The quality control of therapeutic forms of allergens is an essential condition for guaranteeing the clinical efficacy and safety of allergen-specific immunotherapy. The technology for obtaining the granular form of the mixed allergen from house dust mites Dermatophagoides pteronyssinus and Dermatophagoides farinae for oral use was developed in the laboratory of allergens Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera.
AIM: To determine the authenticity of the anphenolic water-salt extract of the mixed allergen from mites D. pteronyssinus and D. farinae, intended for the therapeutic form of the drug.
MATERIALS AND METHODS: Standardization of the obtained allergen extract was performed by protein nitrogen unit using the Nessler method. The protein concentration was determined using the Bradford method. Sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis was used to study the presence of protein composition in mixed allergen. The pH value was determined potentiometrically. The specific activity of the standard allergen and the experimental mixed allergen were compared using the reverse immunoassay method.
RESULTS: Sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis showed the preservation of the protein profile of the water-salt extract of the mixed allergen D. pteronyssinus and D. farinae, corresponding to the protein profile of allergens of house dust mites. No statistically significant differences were noted in the optical density of the studied allergen (four drug series) and the standard allergen with reference serums containing specific IgE to D. pteronyssinus or D. farinae when reacting with a class 3 reference serum in the reverse immunoassay method (р >0.05).
CONCLUSIONS: The result of the study in accordance with the State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV edition is a confirmation of the authenticity of the drug. Not phenolic extraction did not affect the main allergenic components of the mixed allergen D. pteronyssinus and D. farinae and allowed it to maintain a high degree of specificity.
Обоснование. Стандартизация лечебных форм аллергенов ― процесс установления и применения единой системы показателей качества и методов контроля. Проведение контроля качества лечебных форм аллергенов является неотъемлемым условием гарантии клинической эффективности и безопасности аллергенспецифической иммунотерапии. В лаборатории по разработке аллергенов Научно-исследовательского института вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова подготовлена технология получения гранулированной формы микст-аллергена из клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae для перорального применения.
Цель ― определение подлинности бесфенольного водно-солевого экстракта микст-аллергена из клещей Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae, предназначенного для лечебной формы препарата.
Материалы и методы. Стандартизация полученного экстракта аллергена происходила по единицам белкового азота (метод Несслера); количество белка в искомом экстракте и нативном стандартном аллергене подсчитывали методом Бредфорда. Наличие аллергокомпонентов в микст-аллергене определяли с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis). Величину рН определяли потенциометрическим методом. Сравнение специфической активности стандартного аллергена и экспериментального микст-аллергена проводили методом реверсивного иммуноанализа (reversible allergosorbent test).
Результаты. Электрофорез в полиакриламидном геле по Лэммли показал сохранение белкового профиля водно- солевого экстракта микст-аллергена Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae соответствующего белковому профилю аллергенов клещей домашней пыли. По результатам реверсивного иммуноанализа с референс-сыворотками, содержащими специфические IgE к Dermatophagoides pteronyssinus или Dermatophagoides farinae, не выявлено статистически значимых отличий оптической плотности исследуемого аллергена (четыре серии препарата) и стандартного аллергена при реакции с референс-сывороткой 3-го класса (р >0,05).
Заключение. Таким образом, выполненные исследования подтвердили подлинность бесфенольного водно-солевого экстракта микст-аллергена из клещей Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae в качестве лечебной формы препарата, что отражено в Государственной фармакопее Российской Федерации (ОФС.1.7.2.0034.15). Бесфенольное экстрагирование не повлияло на основные аллергенные компоненты микст-аллергена Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae и позволило ему сохранить высокую степень специфичности.