A Bioequivalence Study of Allergostin® Compared to Administration of Kestin® in Healthy Volunteers

Full Text

Введение

По данным открытых литературных источников, хроническая крапивница поражает до 1,8% взрослого и 0,1–3% детского населения. Распространенность острой крапивницы по всему миру – 8–20%. Продолжительность заболевания у взрослых составляет 6–12 нед у 52,8%, 3–6 мес у 18,5%, 7–12 мес у 9,4%, от 1 года до 5 лет – у 8,7% и более 5 лет – у 11,3% [1, 2]. Взрослые болеют чаще детей, женщины чаще мужчин [3].

Ведущую роль в патогенезе крапивницы и аллергического ринита (АР), а также некоторых разновидностей кожного зуда играет гистамин. Соответственно, при этих нозологических формах антигистаминные средства являются основой линией терапии. Механизм их действия связан с блокадой Н1-гистаминовых рецепторов и препятствием высвобождению гистамина из тучных клеток и базофилов.

Эбастин (действующее вещество препаратов Кестин^® и Аллергостин^®) представляет собой противоаллергическое лекарственное средство, которое относится ко второму поколению лекарственных препаратов фармако-терапевтической группы H₁-гистаминовых рецепторов блокатор [4, 5].

Установлено, что помимо блокирования H1-рецепторов эбастин снижает уровень катионного белка эозинофилов в сыворотке крови и эозинофилии периферической крови, уменьшает высвобождение гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора. In vitro эбастин ингибирует анти-IgE-индуцированное (IgE – иммуноглобулины класса Е) высвобождение простагландинов и лейкотриенов клетками назальных полипов.

Антигистаминное действие и фармакокинетику эбастина изучили в ряде клинических исследований [6, 7]. Эбастин представляет собой пролекарство, которое быстро метаболизируется в печени с образованием активного метаболита карэбастина [8, 9].

Компания «ООО «НТФФ «ПОЛИСАН», Россия, разработала лекарственную форму эбастина в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой.

В данной статье представлены результаты исследования биоэквивалентности препарата с торговым наименованием (ТН) Аллергостин^® в сравнении с препаратом под ТН Кестин^®.

Цель

Целью настоящего исследования являлось изучение сравнительной фармакокинетики и подтверждение биоэквивалентности препаратов Аллергостин^®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг («ООО «НТФФ «ПОЛИСАН», Россия), и Кестин^®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг (Алмирал С.А., Испания), у здоровых добровольцев после однократного приема внутрь натощак. В качестве дополнительной цели проведена оценка фармакокинетических параметров и относительной биодоступности активного метаболита карэбастина и исходного соединения эбастина после однократного приема исследуемых препаратов внутрь натощак в дозировке 20 мг.

Материалы и методы

Этические принципы

Данное исследование было проведено после получения разрешения на проведение клинического исследования Министерства здравоохранения РФ (РКИ №205 от 14.04.2020 г.), а также одобрения Совета по Этике при нем и локального этического комитета исследовательского центра, в полном соответствии  с требованиями надлежащей клинической практики Международного совета по гармонизации (ICH GCP) E6 (R2), правилами надлежащей клинической практики Евразийского экономического союза, этическими принципами, изложенными в Хельсинкской Декларации Всемирной Медицинской Ассоциации (Форталеза, 2013 г.). Все добровольцы подписали форму информированного согласия до начала процедур исследования.

Дизайн исследования

Дизайн исследования был разработан с учетом как российских рекомендаций по проведению исследований биоэквивалентности [10, 11], так и международных руководств [12, 13]. Данное исследование биоэквивалентности являлось открытым, сравнительным, рандомизированным, одно­центровым, перекрестным повторным клиническим исследованием с двумя периодами по оценке био­эквивалентности препаратов Аллергостин^®, (эбастин, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг) и Кестин^® (эбастин, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг) при однократном приеме внутрь натощак у взрослых здоровых добровольцев мужского и женского пола.

Клинический этап исследования биоэквивалентности был проведен на базе центра ООО «НИЦ Эко-безопасность» в период с 23 апреля по 24 июня 2021 г. Всего было скринировано 33 человека, из которых 26 здоровых добровольцев мужского и женского пола в возрасте от 19 до 37 лет (включительно) были отобраны в соответствии с критериями включения (по 13 в каждой группе). Все субъекты завершили участие в исследовании согласно протоколу, за исключением одного добровольца, который досрочно завершил участие в исследовании по причине «Отзыв информированного согласия» после первого периода. Таким образом, в первом периоде препарат приняли 26 человек, во втором – 25 человек.

Средний возраст включенных в исследование добровольцев составил 25,0 лет, рост – 172,0 см, масса тела – 66,3 кг, средний индекс массы тела – 22,4 кг/м². По исходным демографическим и антропометрическим характеристикам добровольцев статистически значимых различий между группами обнаружено не было.

Все добровольцы были разделены на 2 группы: группа 1 (Г1) и группа 2 (Г2). Каждый доброволец был отнесен к одной из групп с определенной последовательностью приема препаратов: TR или RT (Т - тестовый препарат Аллергостин^®, R – референтный препарат - Кестин^®). Добровольцы, включенные в группу 1, в первом периоде исследования получали тестовый препарат (Т), а представители группы 2 – препарат сравнения (R). Во втором периоде, соответственно, наоборот.

На каждом из этапов добровольцы были госпитализированы одной когортой в одном клиническом центре, все процедуры были стандартизированы, их выполнение контролировалось сотрудниками исследовательского центра. Получение препарата и манипуляции с кровью проводились в одинаковых условиях (включая, но не ограничиваясь, использованием одинакового типа и производства внутривенных катетеров, игл, одинаковых систем дезинфекции, типов лабораторных и транспортных пробирок, морозильных камер и т. д.). Все добровольцы из обеих групп получали одинаковую пищу в каждом из периодов госпитализации, соблюдался единый интервал времени между периодами.

Отбор проб и пробоподготовка

Временные точки отбора биообразцов для оценки концентрации карэбастина и эбастина в плазме крови были выбраны таким образом, чтобы получить наиболее полные данные для каждого фрагмента фармакокинетической кривой. С этой целью был предусмотрен частый отбор образцов вблизи T_max, а также не менее 3-4 точек в течение терминальной фазы. Таким образом, отбор биообразцов производился в следующих точках: перед приемом тестового/референтного препарата и далее через 30 мин, 1 ч, 1 ч 20 мин, 1 ч 40 мин, 2 ч, 2 ч 20 мин, 2 ч 40 мин, 3 ч, 3 ч 20 мин, 3 ч 40 мин, 4 ч, 4 ч 20 мин, 4 ч 40 мин, 5 ч, 5 ч 30 мин, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 10 ч, 12 ч, 18 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч после приема препаратов.

Образцы крови отбирались с помощью кубитального катетера, установленного в вену в течение 12 часов после приема препарата. Далее отбор образцов крови осуществлялся посредством венепункции (с использованием вакуумных пробирок с К₂ЭДТА). В каждую вакуумную пробирку отбиралось 6 мл крови, пробирки перемешивались, через 30 минут центрифугировались при 3000 оборотах/мин с холодовым режимом +4±2 °С в течение 10 мин для отделения плазмы. Каждый образец плазмы разделялся на две аликвоты путем переноса в пластиковые криопробирки и замораживался при температуре -70±10 °C или ниже. В дальнейшем образцы хранились при температуре ≤ –70 °C.

Анализ концентрации действующих веществ в образцах

Исследование биоэквивалентности было проведено путем определения концентраций карэбастина и эбастина в плазме крови добровольцев с использованием валидированной методики высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрий (ВЭЖХ-МС/МС) в соответствии с действующими руководствами [12]. В качестве внутреннего стандарта эбастина и каребастина использовали, соответственно, эбастин-d5 и каребастин-d5. Анализ полученных образцов проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе Infinity 1260 (Agilent) с масс-спектрометрическим детектором G6470B (Agilent) с тройным квадруполем и ионизацией электроспреем.

Нижний предел количественного определения эбастина в плазме крови составил 0,1 нг/мл (линейный диапазон 0,1 - 15 нг/мл), для карэбастина – 1 нг/мл (линейный диапазон 1 – 300 нг/мл). После ревалидации калибровочного диапазона нижний предел количественного определения эбастина составил 0,005 нг/мл. Ревалидация была выполнена с целью подтверждения отсутствия эффекта переноса в нулевых точках фармакокинетической кривой эбастина вследствие того, что ожидаемые значения максимальной концентрации (С_max) эбастина не подтвердились. В исследовании значения максимальной концентрации (С_max) эбастина варьировались от 0,110 нг/мл до 6,18 нг/мл.

Статистический анализ

Статистический анализ был проведен при помощи программного пакета для статистического  анализа Statistica 10.0, R 4.1.1 (Package «bear» 2.9.0) и Microsoft Office Excel 2013.   Анализ фармакокинетики и биоэквивалентности  проводили в популяции всех добровольцев, у которых было пропущено не более 2 отборов образцов крови в каждом из периодов, и не более 2-х отборов подряд. Анализ безопасности проводили в популяции всех участников, получивших хотя бы одну дозу тестового или референтного препаратов.

На основании полученных значений  концентраций карэбастина и эбастина в плазме крови добровольцев, в предусмотренные настоящим протоколом временные интервалы, были рассчитаны основные фармакокинетические показатели: С_max – максимальная концентрация лекарственного вещества в крови добровольцев; T_max – время достижения С_max; AUC_0–72 – суммарная площадь под кривой «концентрация-время» в интервале времени от 0 до 72 часов; T_1/2 – период полувыведения; AUC_0–∞ – площадь под кривой «концентрация-время» в интервале времени от 0 до бесконечности; kel – константа скорости терминальной элиминации; C_max/AUC_0-t – уровень скорости всасывания; MRT – время удержания препарата в крови. В тексте нормально распределенные данные представлены в виде M (SD), ассиметрично распределенные – Me (Min; Max). Сравнительный анализ фармакокинетических параметров, не подчиняющихся закону нормального распределения, проводили с помощью непараметрического теста Вилкоксона для парных выборок – Wilcoxon test (нетрансформированные данные, двусторонний тест); нормально распределенных параметров – с помощью параметрического t-критерия Стьюдента для парных выборок – t-test for dependent samples (нетрансформированные данные, двусторонний тест).

Оценка биоэквивалентности препаратов производилась путем сравнения границ доверительных интервалов (ДИ) для отношения геометрических средних показателей AUC (0–72) и С_max после приема исследуемого и референтного препаратов с установленными границами эквивалентности, равными 80,00–125,00%. Для установления биоэквивалентности использовался дисперсионный анализ (ANOVA) логарифмически преобразованных показателей карэбастина и эбастина, необходимых для оценки биоэквивалентности (AUC и С_max).

Результаты и их обсуждение

Безопасность

На протяжении всего исследования как тестовый, так и референтный препараты хорошо переносились добровольцами. Показатели гематологического и биохимического анализа крови, а также анализа мочи и физиологических показателей у большинства добровольцев оставались в пределах референсных интервалов в течение всего исследования.

Всего в ходе исследования было зарегистрировано 8 НЯ, связанных с изменением соматического статуса и лабораторных показателей добровольцев. По степени тяжести все 8 из 8 случаев (100 %) отнесены к легкой степени тяжести по общим терминологическим критериям нежелательных явлений (Common Terminology Criteria
for Adverse Events / CTCAE 5.0). Перечень НЯ представлен  в таблице 1. По заключению исследователей степень связи с исследуемыми препаратами установлена как «возможная». При сравнении частоты регистрации отдельных НЯ не было выявлено достоверных различий (р>0,05) после приема тестового и референтного препаратов, на основании чего можно сделать вывод о схожей переносимости препаратов.

Таблица 1. Сравнительные характеристики частот нежелательных явлений (НЯ) в исследуемых группах

Table 1. Comparative characteristics of the frequencies of adverse events (AEs) in the study groups

Примечание: НЯ – нежелательное явление, ВГ ДИ – верхняя граница доверительного интервала, НГ ДИ – нижняя граница доверительного интервала.

Фармакокинетические параметры и оценка биоэквивалентности

Фармакокинетические параметры активного метаболита карэбастина в плазме крови добровольцев

Для демонстрации биоэквивалентности использовался основной активный метаболит эбастина - карэбастин. В контексте руководства по исследованию биоэквивалентности [13] эбастин рассматривается как исходное соединение (неактивное пролекарство), поскольку не имеет (или имеет очень низкий) вклад в клиническую эффективность [14, 15, 16, 17, 18, 19]. Эбастин быстро всасывается и почти полностью метаболизируется в печени до активного метаболита – карэбастина. Значения концентрации карэбастина в плазме (C_max) в 50 раз выше, чем у эбастина. Таким образом, демонстрация биоэквивалентности исходного соединения затруднительна с точки зрения аналитики и возможна только при включении очень большого числа субъектов, поскольку эбастин имеет очень низкие концентрации в плазме крови, быстро и интенсивно метаболизируется, что приводит к сильно варьирующим концентрациям исходного соединения в плазме, что приводит к более высокой вариабельности фармакокинетики.

Таким образом, эбастин соответствует критериям, при которых воздействие исходного соединения является низким и вариабельным, а воздействие активного метаболита намного выше, поэтому приемлемо устанавливать биоэквивалентность для основного активного метаболита карэбастин [13, 20]. Соответственно основой для оценки биоэквивалентности являлись концентрации активного метаболита карэбастина в плазме крови добровольцев. По результатам анализа концентрации карэбастина в плазме крови добровольцев были рассчитаны  значения основных параметров фармакокинетики тестового и референтного препаратов (таблице 2).

Таблица 2. Значения фармакокинетических параметров после приема тестового и референтного препаратов

Table 2. The values of pharmacokinetic parameters after  test and reference drugs oral administration

Как следует из результатов, представленных в таблице 2, значения фармакокинетических параметров после приема тестового и референтного препаратов сопоставимы и достоверно не различаются. При этом параметры биологической доступности активного метаболита карэбастина после приема препаратов Аллергостин^® (ИП) и Кестин^® (ПС) составили: f' в среднем 1,03 (0,33) и f'' – в среднем 1,10 (0,24) относительных единиц.

Усредненные значения изменения концентрации активного метаболита карэбастина в линейных и полулогарифмических шкалах во времени (точках забора препарата), соответственно, после однократного приема изучаемых препаратов представлены на рисунках 1-2. Как видно из представленных в графическом виде данных, фармакокинетические профили сравниваемых препаратов практически не отличались, особенно при логарифмически преобразованных значениях концентрации.

Рисунок 1. Усредненные графики зависимости концентрации активного метаболита карэбастина в плазме крови от времени (точки забора препарата) у добровольцев после приема препаратов Аллергостин® (T) и Кестин® (R) на линейной шкале

Figure 1. Average plots of the dependence of the concentration of the active metabolite of carabastin in blood plasma on time (drug sampling points) in volunteers after taking Allergostin^® (T) and Kestin^® (R) on a linear scale

Рисунок 2. Усредненные графики зависимости концентрации активного метаболита карэбастина в плазме крови от времени (точки забора препарата) у добровольцев после приема препаратов Аллергостин® (T) и Кестин^® (R) на полулогарифмической шкале

Figure 2. Average plots of the dependence of the concentration of the active metabolite of carabastin in blood plasma on time (drug sampling points) in volunteers after taking Allergostin® (T) and Kestin® (R) on a semi-logarithmic scale

Оценка биоэквивалентности

Биоэквивалентность тестового и референтного препаратов оценивали на основании фармакокинетических данных активного метаболита карэбастина с использованием ANOVA. Согласно протоколу, препараты считались биоэквивалентными, если границы оцененного ДИ для AUC_0-t и C_max находились в пределах 80,00–125,00  %.

Рассчитанные значения 90%-ных доверительных интервалов для отношения средних геометрических значений фармакокинетических параметров AUC_0-t и C_max показали, что доверительный интервал для AUC_0-t активного метаболита карэбастина составил 88,32-107,73 % (отношение средних 97,55 %). Для С_max активного метаболита карэбастина доверительный интервал составил 85,84–113,37  % (отношение средних 98,65 %). Полученные доверительные интервалы для AUC_0-t и С_max не выходили за пределы, установленных Протоколом исследования (80 – 125 %), что свидетельствовало о биоэквивалентности воспроизведенного препарата Аллергостин^®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг (ООО «НТФФ «ПОЛИСАН», Россия) и референтного препарата Кестин^®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг (Алмирал С.А., Испания).

Результаты исследования биоэквивалентности послужили основанием для регистрации препарата Аллергостин^®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг (ООО «НТФФ «ПОЛИСАН», Россия) под номером ЛП-№(001179)-(РГ-RU).

Выводы

В рамках регистрации воспроизведенного препарата Аллергостин^® было проведено исследование его биоэквивалентности от­носительно препарата Кестин^® при однократном приеме здоровыми добровольцами натощак. На ос­новании полученных данных сделано заключение, что исследуемые препараты характеризуются высокой степенью сходства показателей фармакокинетики. Индивидуальные и усредненные профили фармако­кинетических кривых воспроизведенного и референтного препаратов по активному метаболиту карэбастину имеют совпадающие формы. Исследуемые препараты характеризуются близкими значениями показателей относительной биодоступности карэбастина и максимальной концентрацией карэбастина. Доверительный интервал для отношений средних геометрических значений оцениваемых показателей карэбастина тестового и референтного препаратов полностью соответствуют установленным пределам.

Также был показан благоприятный профиль безопасности и удовлетворительная переносимость препарата Аллергостин^®, сопоставимый с профилем референтного препарата Кестин^®.

Таким образом, выполненное исследование позволяет констатировать биоэквивалентность воспроизведенного препарата Аллергостин^®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг (ООО «НТФФ «ПОЛИСАН», Россия) относительно референтного препарата Кестин^®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 20 мг (Алмирал С.А., Испания).

About the authors

Ekaterina Talikova

Author for correspondence.
Email: e_talikova@polysan.ru
ORCID iD: 0000-0001-6509-9425
SPIN-code: 1129-8267

Leading consultant for scientific and clinical work of the Information and Patent Department of the Directorate for Science, Candidate of Medical Sciences

References