А.В. Чернышева1, В.В. Тютяева2, А.В. Пивоварова2, И.В. Андреев1, М.Н. Санков1, Ю.В. Кузьменко2, Е.С. Стародубова2, А.И. Мартынов1, В.Л. Карпов2

1 ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, г. Москва
2 ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, г. Москва

Ключевые слова: аллерген пыльцы, береза повислая, Bet v 2, профилин, методика очистки

Цель исследования. Получение иммунологически активного рекомбинантного белка-аллергена Bet v 2
пыльцы березы.
Материалы и методы. Из образца пыльцы березы была выделена мРНК. С помощью методики SMART
была получена библиотека кДНК. С помощью ПЦР с праймерами с кДНК амплифицировали ген Bet v 2.
Полученный ПЦР-фрагмент гена был клонирован в вектор pET-29b(+). Р екомбинантный белок Bet v 2
был экспрессирован в клетках E. coli, трансформированных плазмидой. Р екомбинантный белок очищали
с использованием Ni-NTA агарозы. И ммунологическую активность рекомбинантного белка Bet v 2 опре-
деляли с помощью ИФА и иммуноблота.
Результаты. В ходе работы была создана система по наработке препарата рекомбинантного аллергена
Bet v 2, пригодного для иммунологических тестов. Н а первом этапе из пыльцы березы, собранной на
территории Р Ф, был клонирован ген аллергена Bet v 2. Ген был включен в вектор pET29(+) для экспрес-
сии в бактериальных клетках. С данной плазмидой был получен экспрессионный штамм клеток E. coli.
В бактериальных клетках активировался синтез рекомбинантного белка, который накапливался в тельцах
включения. Была разработана методика выделения рекомбинантного белка Bet v 2 из телец включения с
помощью одного раунда хроматографической очистки. В ыделение рекомбинантного белка проводили с
помощью хроматографии на Ni-агарозе. В результате был получен высокоочищенный препарат реком-
бинантного аллергена. В ИФА узнавание рекомбинантного белка Bet v 2 сыворотками различалось, что
говорит о разной степени сенсибилизации пациентов к данному аллергену. В иммуноблот-тесте препарат
был активен только в 15% случаев. По всей видимости, активные эпитопы данного аллергена в основном
конформационные и активны в тесте И ФА, тогда как линейные эпитопы, активные в иммуноблоте, со-
ставляют малую часть.
Заключение. Создана система для наработки препарата рекомбинантного аллергена Bet v 2, пригодного
для иммунологических тестов.